| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 1 综述 | 第14-25页 |
| ·百子莲概况 | 第14页 |
| ·单子叶植物农杆菌遗传转化研究 | 第14-18页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第15-18页 |
| ·农杆菌Ti质粒基因转化机理 | 第15-16页 |
| ·农杆菌不易介导单子叶植物 | 第16-18页 |
| ·单子叶植物感染农杆菌相对困难的假说 | 第16-17页 |
| ·单子叶植物本身的因素 | 第17页 |
| ·农杆菌转化效率的影响因素 | 第17页 |
| ·提高农杆菌转化单子叶植物效率的方法 | 第17-18页 |
| ·农杆菌转化方法的优点 | 第18页 |
| ·植物抗寒及基因表达研究进展 | 第18-23页 |
| ·植物抗寒研究 | 第18-19页 |
| ·植物低温损害机理 | 第18-19页 |
| ·当前提高植物抗寒性措施 | 第19页 |
| ·植物抗寒分子生物学上的研究 | 第19-23页 |
| ·CBF以及同源基因的发现 | 第20-21页 |
| ·CBF的结构和位置 | 第21页 |
| ·CBF的表达和调控 | 第21-22页 |
| ·CBF的生理生化功能及其对植物耐逆性作用 | 第22-23页 |
| ·百子莲的研究进展与百子莲基因工程的现状 | 第23-24页 |
| ·百子莲国外研究状况 | 第23-24页 |
| ·百子莲国内研究状况 | 第24页 |
| ·百子莲在基因工程上的研究 | 第24页 |
| ·试验目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-42页 |
| ·材料和试剂 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-42页 |
| ·百子莲再生体系培养基 | 第27-28页 |
| ·AtCBF克隆和载体构建的方法 | 第28-36页 |
| ·农杆菌和大肠杆菌培养基 | 第28-29页 |
| ·LB平板培养基(g/L) | 第28-29页 |
| ·LB液体培养基(g/L) | 第29页 |
| ·抗生素的配制和保存 | 第29页 |
| ·拟南芥总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·AtCBF基因的引物设计和PCR扩增 | 第30-32页 |
| ·AtCBF基因的引物设计 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物初步检测 | 第31-32页 |
| ·DNA片段回收及克隆载体的构建 | 第32-33页 |
| ·DNA片段回收及纯化 | 第32-33页 |
| ·克隆载体的构建 | 第33页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌及阳性菌株的筛选和鉴定 | 第33-35页 |
| ·感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第34页 |
| ·阳性菌株的筛选和鉴定 | 第34-35页 |
| ·表达载体的构建、农杆菌转化及阳性菌株的筛选和鉴定 | 第35-36页 |
| ·表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·农杆菌转化 | 第36页 |
| ·农杆菌介导百子莲高效转化体系的的建立 | 第36-42页 |
| ·百子莲抗潮霉素梯度试验 | 第36-37页 |
| ·应用正交试验设计优化农杆菌介导百子莲转化体系 | 第37-40页 |
| ·菌液的制备 | 第37-38页 |
| ·侵染 | 第38页 |
| ·GUS组织化学分析转化后的愈伤 | 第38-39页 |
| ·正交试验设计 | 第39页 |
| ·抗潮霉素(Hyg)植株的筛选 | 第39-40页 |
| ·阳性植株的检测 | 第40-42页 |
| ·抗性植株的GUS组织化学染色 | 第40-41页 |
| ·抗性植株PCR检测 | 第41页 |
| ·PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| ·AtCBF基因克隆和载体的构建 | 第42-46页 |
| ·AtCBF基因克隆 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·AtCBF测序和比较分析 | 第43-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导百子莲转化体系的优化 | 第46-53页 |
| ·百子莲抗潮霉素梯度试验结果 | 第46-47页 |
| ·GUS组织化学结果 | 第47-48页 |
| ·正交试验设计结果 | 第48-53页 |
| ·预培养时间、预培养培养基中AS的浓度、预培养时间、菌液的浓度、侵染菌液中AS的浓度、侵染时间对转化效率的影响 | 第49-50页 |
| ·各因素的不同水平对百子莲转化的影响 | 第50-52页 |
| ·菌液浓度对转化效率的影响 | 第50-51页 |
| ·预培养时间对转化效率的影响 | 第51页 |
| ·侵菌时间对转化效率的影响 | 第51页 |
| ·预培养基中AS的浓度对转化效率的影响 | 第51页 |
| ·侵菌液中AS的浓度对转化效率的影响 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| ·抗性植株的检测 | 第53-55页 |
| ·抗性植株的GUS组织化学染色 | 第53页 |
| ·抗性植株的PCR检测 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第55页 |
| ·总结 | 第55页 |
| ·分析 | 第55-56页 |
| 4 讨论与展望 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |