| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第11-35页 |
| 1.1 Sirtuin | 第11-13页 |
| 1.1.1 Sirtuin的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 Sirtuin的结构组成及分类 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Sirtuin的生化活性 | 第12-13页 |
| 1.2 Sirtuin的功能 | 第13-17页 |
| 1.2.1 Sirtuin与衰老 | 第13-14页 |
| 1.2.2 Sirtuin与癌症 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Sirtuin在高等哺乳动物细胞中的功能 | 第15-16页 |
| 1.2.4 Sirtuin在细菌中的功能 | 第16-17页 |
| 1.3 NAD~+ | 第17-19页 |
| 1.3.1 NAD~+的合成及分解 | 第17-18页 |
| 1.3.2 NAD~+的功能 | 第18-19页 |
| 1.4 分枝杆菌与sirtuin | 第19-25页 |
| 1.4.1 结核病的流行病学 | 第19-20页 |
| 1.4.2 结核分枝杆菌与耻垢分枝杆菌 | 第20页 |
| 1.4.3 INH的作用机制 | 第20-23页 |
| 1.4.4 Sirtuin在分枝杆菌中的研究现状 | 第23-25页 |
| 1.5 胶质细胞瘤及肿瘤干细胞 | 第25-26页 |
| 1.6 转录因子SOX10的研究现状 | 第26-27页 |
| 1.7 蛋白质组学 | 第27-32页 |
| 1.7.1 Bottom-up和Top-down | 第28-29页 |
| 1.7.2 Middle-down | 第29-30页 |
| 1.7.3 外膜蛋白酶(OmpT) | 第30-32页 |
| 1.8 乙酰化组学 | 第32-34页 |
| 1.8.1 蛋白的乙酰化修饰 | 第32页 |
| 1.8.2 乙酰化组学 | 第32-34页 |
| 1.9 本论文的主要研究内容 | 第34-35页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第35-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 细菌及细胞培养实验试剂 | 第35页 |
| 2.1.3 其它实验试剂 | 第35-36页 |
| 2.2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-57页 |
| 2.3.1 细菌及细胞培养 | 第37页 |
| 2.3.2 载体构建 | 第37-40页 |
| 2.3.3 mc~2155-MS5175菌株过表达效率的测定 | 第40页 |
| 2.3.4 细菌内NAD~+和NADH的测定 | 第40-41页 |
| 2.3.5 生长曲线及耐药曲线的测定 | 第41-42页 |
| 2.3.6 克隆形成数目的测定 | 第42页 |
| 2.3.7 蛋白质组学分析 | 第42-44页 |
| 2.3.8 乙酰化组学分析 | 第44-45页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第45-48页 |
| 2.3.10 稳转细胞系的构建 | 第48-50页 |
| 2.3.11 OmpT表达菌株的构建及蛋白表达小试 | 第50页 |
| 2.3.12 OmpT的表达及纯化 | 第50-54页 |
| 2.3.13 OmpT的活性测定 | 第54-55页 |
| 2.3.14 底物肽的氨甲酰化修饰 | 第55页 |
| 2.3.15 底物肽段氨甲酰化修饰对酶切效率的影响 | 第55-57页 |
| 第3章 NAD~+依赖性去乙酰化酶功能的多组学分析 | 第57-83页 |
| 3.1 MSMEG_5175在耻垢分枝杆菌中的功能研究 | 第57-80页 |
| 3.1.1 MSMEG_5175过表达菌株的构建 | 第58-60页 |
| 3.1.2 MSMEG_5175过表达对NAD~+及NADH水平的影响 | 第60-61页 |
| 3.1.3 MSMEG_5175对耻垢分枝杆菌生长及INH耐受性的影响 | 第61-63页 |
| 3.1.4 mc~2155-MS5175和mc~2155-pMV26的定量蛋白质组学分析 | 第63-67页 |
| 3.1.5 乙酰化组学分析 | 第67-77页 |
| 3.1.6 MSMEG_5175的相互作用蛋白 | 第77-80页 |
| 3.2 小结 | 第80页 |
| 3.3 讨论 | 第80-83页 |
| 第4章 SOX10在胶质瘤干细胞形成过程中的作用 | 第83-98页 |
| 4.1 本章的研究内容 | 第83页 |
| 4.2 NAD~+依赖的去乙酰化酶对人胶质瘤细胞U87生长及耐药性的影响 | 第83-85页 |
| 4.2.1 SIRT1敲低细胞系的构建 | 第84页 |
| 4.2.2 SIRT1敲低对细胞生长及耐药性的影响 | 第84-85页 |
| 4.3 CSCs的筛选 | 第85-86页 |
| 4.4 CSCs及U87细胞生长速度和TMZ耐受性的测定 | 第86-87页 |
| 4.5 CSCs及U87细胞的定量蛋白质组学分析 | 第87-91页 |
| 4.6 SOX10在CSCs中的高表达及SOX10过表达细胞系的构建 | 第91-92页 |
| 4.7 SOX10过表达对CSCs形成的影响 | 第92-94页 |
| 4.8 SOX10过表达细胞系的定量蛋白质组学分析 | 第94-95页 |
| 4.9 小结 | 第95-96页 |
| 4.10 讨论 | 第96-98页 |
| 第5章 蛋白质组学工具酶OmpT的表达、纯化及活性评估 | 第98-115页 |
| 5.1 OmpT-pet28a重组质粒的构建 | 第98-99页 |
| 5.2 OmpT的诱导表达 | 第99-100页 |
| 5.2.1 OmpT诱导表达小试 | 第99页 |
| 5.2.2 OmpT诱导表达中试 | 第99-100页 |
| 5.3 OmpT的变性 | 第100-101页 |
| 5.4 OmpT再复性及纯化条件的优化 | 第101-103页 |
| 5.5 OmpT的纯化 | 第103-105页 |
| 5.6 OmpT活性测定 | 第105-107页 |
| 5.6.1 荧光法 | 第105-106页 |
| 5.6.2 色谱法 | 第106-107页 |
| 5.7 底物氨甲酰化修饰对OmpT活性的影响 | 第107-112页 |
| 5.7.1 氨甲酰化修饰肽段的制备 | 第109-110页 |
| 5.7.2 底物肽氨甲酰化修饰对OmpT酶活的影响 | 第110-112页 |
| 5.8 以牛血清白蛋白为底物的OmpT酶活测定 | 第112-113页 |
| 5.9 小结 | 第113页 |
| 5.10 讨论 | 第113-115页 |
| 第6章 总结与展望 | 第115-121页 |
| 6.1 论文总结 | 第115-118页 |
| 6.1.1 NAD~+依赖性去乙酰化酶功能的多组学分析 | 第115-117页 |
| 6.1.2 SOX10在胶质瘤干细胞形成过程中的作用 | 第117-118页 |
| 6.1.3 蛋白质组学工具酶OmpT的表达、纯化及活性评估 | 第118页 |
| 6.2 论文展望 | 第118-121页 |
| 参考文献 | 第121-134页 |
| 附录 A 过表达菌株mc~2155-MS5175中表达上调蛋白列表 | 第134-137页 |
| 附录 B 过表达菌株mc~2155-MS5175中表达下调蛋白列表 | 第137-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第144页 |
