| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| ·RNA干扰研究进展 | 第13-20页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第13-14页 |
| ·RNAi干扰机制 | 第14-16页 |
| ·启动阶段 | 第14页 |
| ·效应阶段 | 第14-15页 |
| ·扩增阶段 | 第15-16页 |
| ·RNAi干扰相关的主要蛋白因子 | 第16-19页 |
| ·Dicer酶 | 第16-17页 |
| ·Argonaute(AGO)蛋白家族 | 第17-18页 |
| ·RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP) | 第18-19页 |
| ·RNAi的生物学功能 | 第19-20页 |
| ·转录水平上调节基因表达 | 第19页 |
| ·在翻译水平调节生物体发育与生理代谢 | 第19页 |
| ·防御病毒入侵 | 第19-20页 |
| ·本文研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·基因的克隆 | 第21-27页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株及载体 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第22页 |
| ·质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·质粒的纯化 | 第22-23页 |
| ·碱裂解法粗提质粒 | 第23页 |
| ·Trizol法提取总RNA | 第23-24页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第24页 |
| ·基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·DNA片段的切胶回收 | 第25页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第25-26页 |
| ·连接体系 | 第25-26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第26-27页 |
| ·PCR检测 | 第26页 |
| ·质粒检测 | 第26页 |
| ·酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·DNA序列测定 | 第27页 |
| ·遗传转化 | 第27-30页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·菌株及载体 | 第27页 |
| ·农杆菌所用培养基 | 第27-28页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第28页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第28页 |
| ·转基因所用的培养基 | 第28-30页 |
| ·所用培养基母液 | 第28-29页 |
| ·植物激素的配制 | 第29页 |
| ·水稻幼胚、成熟胚遗传转化各阶段所需的培养基 | 第29-30页 |
| ·转基因植株的检测 | 第30-34页 |
| ·转基因水稻DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·转基因水稻总RNA的提取 | 第31页 |
| ·PCR检测 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR检测 | 第32页 |
| ·PCR-Southern Blot | 第32-34页 |
| ·标记探针 | 第32页 |
| ·转膜 | 第32页 |
| ·杂交 | 第32-33页 |
| ·检测 | 第33-34页 |
| 第三章 农杆菌介导AtDCL2、AtDCL4和AtRDR6基因对水稻的遗传转化 | 第34-46页 |
| ·材料与方法 | 第34-37页 |
| ·AtDCL2、AtDCL4和AtRDR6基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第35-37页 |
| ·菌液的准备 | 第35页 |
| ·转化受体的准备 | 第35-36页 |
| ·水稻幼胚愈伤组织的诱导与培养 | 第35-36页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导与培养 | 第36页 |
| ·愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第36页 |
| ·水稻幼胚为试材的愈伤组织共培养 | 第36页 |
| ·水稻成熟胚为试材的愈伤组织共培养 | 第36页 |
| ·抗性愈伤的筛选与分化 | 第36-37页 |
| ·水稻幼胚为试材的愈伤的筛选与分化 | 第36-37页 |
| ·水稻成熟胚为试材的愈伤的筛选与分化 | 第37页 |
| ·生根壮苗和移栽 | 第37页 |
| ·转基因再生水稻的分子生物学检测 | 第37页 |
| ·PCR及RT-PCR检测 | 第37页 |
| ·PCR-Southern blot | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-44页 |
| ·AtDCL2、AtDCL4和AtRDR6基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·转化及转基因植株的获得 | 第38-40页 |
| ·T0代转基因植株的分子生物学检测 | 第40-44页 |
| ·PCR检测 | 第40-42页 |
| ·PCR-Southern blot分析 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·启动子的选择 | 第44页 |
| ·转化受体的选择 | 第44页 |
| ·培养基的改良 | 第44-45页 |
| ·其他培养条件的优化 | 第45页 |
| ·转基因水稻的获得 | 第45-46页 |
| 第四章 AtDCL2基因的3'UTR分析 | 第46-54页 |
| ·材料与方法 | 第47-50页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·AtDCL2基因3’UTR的克隆 | 第47-48页 |
| ·序列分析 | 第48页 |
| ·载体构建 | 第48-49页 |
| ·农杆菌瞬时转染烟草 | 第49页 |
| ·Real-time PCR检测GFP表达量的差异 | 第49-50页 |
| ·3’UTR突变分析 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·AtDCL2基因的3'UTR区的克隆 | 第50页 |
| ·序列分析 | 第50-51页 |
| ·不同3’UTR对GFP表达量的影响分析 | 第51-52页 |
| ·突变分析 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·获得多株转AtDCL2基因的水稻再生植株 | 第54页 |
| ·获得多株转AtDCL4基因的水稻再生植株 | 第54页 |
| ·获得多株转AtRDR6基因的水稻再生植株 | 第54页 |
| ·AtDCL2基因的3’UTR区具有序列多样性 | 第54页 |
| ·不同的AtDCL23’UTR对GFP表达量有影响 | 第54页 |
| ·AtDCL23’UTR中的三个元件对GFP表达有调节作用 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-56页 |
| ·转基因植株后代的抗性遗传分析 | 第54-55页 |
| ·AtDCL23’UTR的深入研究 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第65-66页 |
