| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 绪论 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 植物的免疫系统 | 第13-20页 |
| 1.1 病原物相关分子模式(PAMPs)触发的免疫(PTI) | 第13-15页 |
| 1.2 效应因子(Effector )触发的免疫(ETI) | 第15-20页 |
| 2 TSWV | 第20-33页 |
| 2.1 Tospovirus的分类、危害与传播 | 第20-22页 |
| 2.2 TSWV的基因组结构与所编码蛋白的功能 | 第22-23页 |
| 2.3 抗性蛋白Sw-5b与移动蛋白NSm | 第23-26页 |
| 2.4 抗性蛋白Tsw与RNA沉默抑制子NSs | 第26-33页 |
| 第二章 番茄免疫受体Sw-5b对Tospovirus广谱抗性的分子机制研究 | 第33-67页 |
| 1 材料与方法 | 第33-45页 |
| 1.1 病毒来源 | 第33页 |
| 1.2 植物材料 | 第33页 |
| 1.3 引物 | 第33页 |
| 1.4 DNA提取 | 第33-34页 |
| 1.5 RNA提取与反转录 | 第34-35页 |
| 1.6 载体构建 | 第35-36页 |
| 1.7 割胶回收 | 第36页 |
| 1.8 胶回收产物加A | 第36-37页 |
| 1.9 加A产物与载体连接 | 第37页 |
| 1.10 转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第37页 |
| 1.11 阳性筛选克隆与测序 | 第37-38页 |
| 1.12 质粒提取 | 第38-39页 |
| 1.13 转化农杆菌GV3101感受态细胞 | 第39-40页 |
| 1.14 农杆菌处理 | 第40页 |
| 1.15 农杆菌浸润 | 第40页 |
| 1.16 原核表达 | 第40-41页 |
| 1.17 酶联免疫吸附分析(ELISA) | 第41-42页 |
| 1.18 免疫共沉淀(Co-IP) | 第42页 |
| 1.19 蛋白质体外结合实验(Pulldown) | 第42-43页 |
| 1.20 Western-blot | 第43-44页 |
| 1.21 过敏性坏死反应(Hypersensitive cell death response,HR)观察和拍照 | 第44页 |
| 1.22 本氏烟转基因 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-63页 |
| 2.1 Sw-5b对Tospovirus病毒的抗性谱分析 | 第45页 |
| 2.2 Sw-5b蛋白通过识别Tospovirus美洲型病毒的效应因子NSm诱导产生HR | 第45-47页 |
| 2.3 TSWV NSm蛋白中一段21 aa的区域对诱导HR很重要 | 第47-50页 |
| 2.4 Tospovirus美洲型病毒的NSm~(21)区域高度保守并能高效诱导Sw-5b蛋白介导的细胞死亡 | 第50-52页 |
| 2.5 Sw-5b蛋白能与NSm~(21)互作 | 第52-53页 |
| 2.6 Sw-5b的NB-ARC-LRR能与NSm~(21)在体外或在植物体内互作 | 第53-57页 |
| 2.7 Sw-5b的NB-ARC-LRR能与NSm~(21)植物体内互作 | 第57-58页 |
| 2.8 R927氨基酸位点是Sw-5b维持自激活状态所必需的 | 第58-61页 |
| 2.9 Sw-5b LRR的氨基酸位点R927与NSm~(21)之间可能存在互作 | 第61-63页 |
| 3 讨论与分析 | 第63-67页 |
| 3.1 Sw-5b通过识别一段保守的NSm~(21)赋予植物对Tospovirus美洲型病毒的广谱抗性 | 第63-64页 |
| 3.2 Sw-5b NLR与NSm~(21)之间存在直接互作 | 第64页 |
| 3.3 NSm~(21)与LRR的结合可能改变关键位点R927从而使Sw-5b激活 | 第64-67页 |
| 第三章 我国TSWV TSW-抗性突破株系的遗传差异分析 | 第67-93页 |
| 1 材料与方法 | 第67-76页 |
| 1.1 病毒来源 | 第67页 |
| 1.2 植物材料 | 第67页 |
| 1.3 引物设计 | 第67页 |
| 1.4 摩擦接种与单斑分离 | 第67-68页 |
| 1.5 寄主验证 | 第68页 |
| 1.6 RNA提取与反转录 | 第68-69页 |
| 1.7 载体构建 | 第69-70页 |
| 1.8 割胶回收 | 第70页 |
| 1.9 胶回收产物加A | 第70-71页 |
| 1.10 加A产物与载体连接 | 第71页 |
| 1.11 转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第71页 |
| 1.12 阳性筛选克隆与测序 | 第71-72页 |
| 1.13 质粒提取 | 第72-73页 |
| 1.14 转化农杆菌GV3101感受态细胞 | 第73页 |
| 1.15 农杆菌处理 | 第73-74页 |
| 1.16 农杆菌浸润 | 第74页 |
| 1.17 ELISA | 第74-75页 |
| 1.18 序列分析与系统进化树的构建 | 第75页 |
| 1.19 GFP荧光观察和拍照 | 第75-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-90页 |
| 2.1 TSWV-LE能突破抗性辣椒的Tsw-抗性 | 第76-79页 |
| 2.2 TSWV-LE接种抗性辣椒的症状 | 第79-80页 |
| 2.3 我国云南地区TSWVTsw-抗性突破株系的调查 | 第80-82页 |
| 2.4 TSWV-LE能诱导抗性植物产生HR,TSWV-YN18和TSWV-YN53丧失诱导能力 | 第82页 |
| 2.5 TSWV-LE、TSWV-YN18和TSWV-YN53都能抑制S-PTGS和IR-PTGS | 第82-84页 |
| 2.6 TSWV-LE、TSWV-YN18和TSWV-YN53 NSs氨基酸序列分析 | 第84-86页 |
| 2.7 云南地区TSWV RB株系的系统进化起源 | 第86-90页 |
| 3 讨论与分析 | 第90-93页 |
| 第四章 全文总结与创新点 | 第93-95页 |
| 全文总结 | 第93页 |
| 创新点 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 附录A 缩略词表 | 第107-109页 |
| 附录B 载体构建及引物信息 | 第109-115页 |
| 附录C 实验所用药剂 | 第115-121页 |
| 附录D TSWVNSS氨基酸序列比对 | 第121-131页 |
| 附录E 研究生期间学术论文发表情况 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
