| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3-4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 干旱胁迫对植物的影响 | 第10-12页 |
| 1.1.1 干旱胁迫对植物生长发育的影响 | 第10-11页 |
| 1.1.2 干旱胁迫对植物细胞结构的影响 | 第11页 |
| 1.1.3 干旱胁迫对植物生理过程的影响 | 第11-12页 |
| 1.2 LEA蛋白研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.1 LEA蛋白的存在 | 第12页 |
| 1.2.2 LEA蛋白理化性质及分类 | 第12-14页 |
| 1.2.3 LEA蛋白结构特征与功能 | 第14-16页 |
| 1.2.4 LEA基因的表达调控 | 第16-17页 |
| 1.3 柠条锦鸡儿 | 第17页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.5 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 实验材料和方法 | 第19-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 质粒 | 第19页 |
| 2.2 实验药品 | 第19-21页 |
| 2.2.1 实验试剂及酶 | 第19页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第19页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.4 培养基及其他主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.4 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.4.1 植物材料培养 | 第21页 |
| 2.4.2 植物总RNA提取及cDNA的获得 | 第21页 |
| 2.4.3 实时荧光定量PCR检测基因表达量 | 第21-22页 |
| 2.4.4 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因全长cDNA的克隆 | 第22-23页 |
| 2.4.5 PCR产物目的片段回收 | 第23页 |
| 2.4.6 目的片段与克隆载体的连接 | 第23页 |
| 2.4.7 大肠杆菌感受态的制备与目的片段的转化 | 第23-24页 |
| 2.4.8 质粒提取 | 第24页 |
| 2.4.9 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因序列分析 | 第24页 |
| 2.4.10 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.4.11 拟南芥的遗传转化 | 第25页 |
| 2.4.12 转基因植株筛选及鉴定 | 第25页 |
| 2.4.13 不同处理下种子萌发率的检测 | 第25-26页 |
| 2.4.14 拟南芥幼苗主根的非生物胁迫处理及根长测量 | 第26页 |
| 2.4.15 干旱胁迫表型检测及存活率的测定 | 第26页 |
| 2.4.16 失水率检测 | 第26页 |
| 2.4.17 MDA含量和叶绿素含量的测定 | 第26-27页 |
| 2.4.18 胁迫相关基因的检测 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-43页 |
| 3.1 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因全长cDNA的克隆 | 第28页 |
| 3.2 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因生物信息学分析 | 第28-33页 |
| 3.2.1 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因序列分析 | 第28-29页 |
| 3.2.2 CkLEA4-3蛋白理化性质分析 | 第29-30页 |
| 3.2.3 CkLEA4-3蛋白磷酸化和糖基化位点分析 | 第30页 |
| 3.2.4 CkLEA4-3蛋白的二级结构预测 | 第30页 |
| 3.2.5 CkLEA4-3蛋白与其他物种LEA类蛋白多重比对 | 第30-31页 |
| 3.2.6 CkLEA4-3蛋白的系统进化树分析 | 第31-33页 |
| 3.3 柠条锦鸡儿CkLEA4-3基因表达特性分析 | 第33-34页 |
| 3.3.1 CkLEA4-3的组织表达特性分析 | 第33页 |
| 3.3.2 CkLEA4-3基因在不同胁迫处理下的表达分析 | 第33-34页 |
| 3.4 CkLEA4-3基因过表达纯合体的筛选及表达量的检测 | 第34-36页 |
| 3.4.1 过表达载体pCanG-CkLEA4-3的构建 | 第34-35页 |
| 3.4.2 获取过表达CkLEA4-3转基因株系 | 第35-36页 |
| 3.4.3 过表达CkLEA4-3纯合体的鉴定 | 第36页 |
| 3.5 转CkLEA4-3基因拟南芥盐胁迫耐受性检测 | 第36-37页 |
| 3.6 转CkLEA4-3基因拟南芥渗透胁迫耐受性检测 | 第37-39页 |
| 3.7 非生物胁迫对过表达CkLEA4-3拟南芥幼苗根长的影响 | 第39-40页 |
| 3.8 过表达CkLEA4-3拟南芥干旱胁迫表型检测及失水率检测 | 第40-41页 |
| 3.9 过表达CkLEA4-3拟南芥干旱胁迫前后生理指标检测 | 第41-42页 |
| 3.10 过表达CkLEA4-3拟南芥中胁迫相关基因表达检测 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 CkLEA4-3基因序列的分析 | 第43页 |
| 4.2 CkLEA4-3基因表达模式分析 | 第43-44页 |
| 4.3 CkLEA4-3基因参与干旱胁迫响应 | 第44页 |
| 4.4 CkLEA4-3基因参与盐胁迫响应 | 第44-45页 |
| 4.5 CkLEA4-3蛋白在逆境胁迫中的作用机制 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
