枳低温响应基因ERF109和ZFP1转化柑橘及转基因植株鉴定
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-13页 |
| 1.1.1 柑橘产业现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 柑橘转化发展现状及存在问题 | 第11-13页 |
| 1.2 植物抗寒基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 果树抗寒生理生化研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4 ERF家族与ZFP家族 | 第17-21页 |
| 1.4.1 ERF家族与植物抗逆性 | 第17-19页 |
| 1.4.2 ZFP家族与植物抗逆性 | 第19-21页 |
| 1.5 农杆菌介导的柑橘遗传转化影响因素 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-35页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.1 植物材料和菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 载体 | 第24页 |
| 2.2 质粒转化农杆菌 | 第24-25页 |
| 2.3 农杆菌介导的柑橘上胚轴遗传转化方法 | 第25-27页 |
| 2.3.1 植物材料的准备 | 第25页 |
| 2.3.2 农杆菌浸染液的制备 | 第25-26页 |
| 2.3.3 外植体的准备 | 第26页 |
| 2.3.4 浸染与共培养 | 第26页 |
| 2.3.5 筛选培养与再生 | 第26-27页 |
| 2.4 转基因材料的鉴定 | 第27-30页 |
| 2.4.1 柑橘基因组DNA提取 | 第27-28页 |
| 2.4.2 PCR鉴定 | 第28-30页 |
| 2.5 转基因材料基因表达量测定 | 第30-33页 |
| 2.5.1 RNA提取 | 第30页 |
| 2.5.2 反转录 | 第30-31页 |
| 2.5.3 半定量PCR检测 | 第31-32页 |
| 2.5.4 实时荧光定量PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.6 柑橘低温处理 | 第33页 |
| 2.7 生理生化指标的测定 | 第33-35页 |
| 2.7.1 叶绿素荧光测定 | 第33页 |
| 2.7.2 电导率的测定 | 第33-34页 |
| 2.7.3 DAB和NBT染色 | 第34页 |
| 2.7.4 统计分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-43页 |
| 3.1 ERF109转基因柠檬鉴定 | 第35-37页 |
| 3.1.1 ERF109遗传转化及再生 | 第35页 |
| 3.1.2 转基因材料阳性鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.3 转基因材料表达量分析 | 第36-37页 |
| 3.2 ZFP1转基因柠檬鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2.1 ZFP1遗传转化及再生 | 第37页 |
| 3.2.2 转基因材料阳性鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 转基因材料表达量分析 | 第38-39页 |
| 3.3 转基因柠檬超表达株系抗寒性分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 转基因材料低温处理后表型观察 | 第39页 |
| 3.3.2 叶绿素荧光结果 | 第39-40页 |
| 3.3.3 电导率测定 | 第40-41页 |
| 3.3.4 DAB和NBT染色 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 转化过程对不定芽再生的影响因素 | 第43-44页 |
| 4.2 低温胁迫下植物生理生化指标的变化 | 第44页 |
| 4.3 低温胁迫下转基因柠檬的抗逆性 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 图版及说明 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
