| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 朱砂叶螨及其抗药性研究概况 | 第12页 |
| 2 阿维菌素抗性机理研究 | 第12-13页 |
| 3 尿苷二磷酸糖基转移酶的研究 | 第13-20页 |
| 3.1 哺乳动物中的UGTs | 第15-16页 |
| 3.2 植物中的UGTs | 第16-17页 |
| 3.3 昆虫中的UGTs | 第17-20页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 第二章 阿维菌素对朱砂叶螨的毒力测定 | 第22-26页 |
| 1 材料与方法 | 第22-23页 |
| 1.1 朱砂叶螨品系 | 第22页 |
| 1.2 供试试剂 | 第22页 |
| 1.3 实验材料 | 第22页 |
| 1.4 叶碟法 | 第22-23页 |
| 1.5 毒力测定方法 | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-24页 |
| 3 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 朱砂叶螨UDP-糖基转移酶UGTs活性研究 | 第26-32页 |
| 1 材料与方法 | 第26-29页 |
| 1.1 朱砂叶螨品系 | 第26页 |
| 1.2 供试试剂 | 第26页 |
| 1.3 实验仪器 | 第26页 |
| 1.4 试剂配制 | 第26-27页 |
| 1.5 粗酶液的制备 | 第27页 |
| 1.6 酶源蛋白含量的测定 | 第27-28页 |
| 1.7 UDP-糖基转移酶(UGTs)活性的测定 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-30页 |
| 2.1 酶源蛋白含量测定结果 | 第29-30页 |
| 2.2 朱砂叶螨UDP-糖基转移酶活性测定结果 | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 朱砂叶螨UGT201D3基因的全长克隆及mRNA表达模式研究 | 第32-50页 |
| 第1节 朱砂叶螨UGT201D3基因全长克隆 | 第32-44页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| 1.1 朱砂叶螨 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第32-33页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第33-34页 |
| 1.4 扩增引物设计 | 第34页 |
| 1.5 朱砂叶螨总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 1.6 朱砂叶螨cDNA第一链合成 | 第35-36页 |
| 1.7 目的片段克隆与测序 | 第36-38页 |
| 1.8 生物学分析方法 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-42页 |
| 2.1 朱砂叶螨总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2 朱砂叶螨UGT201D3基因全长克隆及生物信息学分析 | 第39-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第2节 朱砂叶螨UGT201D3基因mRNA表达模式研究 | 第44-50页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 品系 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.3 试验仪器 | 第44页 |
| 1.4 qPCR引物的设计 | 第44页 |
| 1.5 各条件下螨的收集 | 第44-45页 |
| 1.6 总RNA的提取 | 第45页 |
| 1.7 反转录合成cDNA | 第45页 |
| 1.8 qPCR | 第45-46页 |
| 1.9 数据分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-48页 |
| 2.1 朱砂叶螨UGT201D3基因在SS和AbR品系中mRNA表达模式 | 第46页 |
| 2.2 朱砂叶螨UGT201D3基因在不同发育阶段mRNA表达模式 | 第46-47页 |
| 2.3 朱砂叶螨UGT201D3基因在阿维菌素胁迫后mRNA表达模式 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 朱砂叶螨阿维菌素抗性相关UGT201D3基因的RNAi研究 | 第50-56页 |
| 1 材料与方法 | 第50-53页 |
| 1.1 供试品系 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 1.3 试验仪器 | 第50页 |
| 1.4 RNAi引物的设计 | 第50-51页 |
| 1.5 dsRNA合成及纯化 | 第51-52页 |
| 1.6 RNA干扰 | 第52页 |
| 1.7 沉默效率检测 | 第52页 |
| 1.8 酶活检测 | 第52-53页 |
| 1.9 对阿维菌素敏感性检测 | 第53页 |
| 1.10 数据分析 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-54页 |
| 2.1 朱砂叶螨UGT201D3-dsRNA抑制效率检测 | 第53页 |
| 2.2 朱砂叶螨干扰后UGTs酶活性的检测 | 第53-54页 |
| 2.3 朱砂叶螨干扰后对阿维菌素敏感性测定 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 朱砂叶螨UGT201D3基因原核表达及对阿维菌素代谢的研究 | 第56-70页 |
| 第1节 朱砂叶螨UGT201D3基因原核表达的研究 | 第56-66页 |
| 1 材料与方法 | 第56-62页 |
| 1.1 朱砂叶螨品系 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 1.4 常用储备液及培养基的制备 | 第57页 |
| 1.5 朱砂叶螨UGT201D3基因重组表达质粒的构建 | 第57-59页 |
| 1.6 转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第59页 |
| 1.7 朱砂叶螨UGT201D3基因的诱导表达 | 第59-60页 |
| 1.8 蛋白样品SDS-PAGE电泳检测 | 第60-61页 |
| 1.9 WesternBlot检测 | 第61-62页 |
| 1.10 重组蛋白生化特性测定 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-64页 |
| 2.1 朱砂叶螨UGT201D3基因的原核表达以及Westernblotting分析 | 第62-64页 |
| 2.2 重组蛋白活性以及其动力学参数分析 | 第64页 |
| 2.3 阿维菌素对重组UGT201D3蛋白离体抑制分析 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第2节 朱砂叶螨UGT201D3重组蛋白对阿维菌素的代谢研究 | 第66-70页 |
| 1 材料与方法 | 第66-67页 |
| 1.1 试剂 | 第66页 |
| 1.2 试验仪器 | 第66页 |
| 1.3 色谱条件 | 第66页 |
| 1.4 阿维菌素标准曲线制作 | 第66页 |
| 1.5 重组蛋白与阿维菌素反应 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-68页 |
| 2.1 阿维菌素标准曲线 | 第67-68页 |
| 2.2 离体代谢检测 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第七章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 在读期间发表的文章 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
