RSV四川分离物p3基因原核表达及其影响本氏烟内源基因表达研究
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 水稻条纹病毒 | 第11-14页 |
| 1.1 水稻条纹病毒的危害 | 第11页 |
| 1.2 水稻条纹病毒基因组结构 | 第11-14页 |
| 2 植物RNA沉默与病毒编码的沉默抑制子 | 第14-18页 |
| 2.1 植物的RNA沉默 | 第14-16页 |
| 2.2 植物病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第16-18页 |
| 3 转录组测序技术在功能基因研究上的应用 | 第18-19页 |
| 4 本文研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 RSV四川分离物p3基因克隆及其原核表达 | 第21-31页 |
| 1 材料和方法 | 第21-25页 |
| 1.1 材料 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 1.4 Dot-ELISA检测方法 | 第21-22页 |
| 1.5 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 1.6 PCR扩增和T载体连接 | 第23页 |
| 1.7 RSVp3基因原核表达载体构建 | 第23-24页 |
| 1.8 RSVp3基因序列分析 | 第24页 |
| 1.9 融合蛋白的表达方法 | 第24页 |
| 1.10 Westernblot检测 | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.1 田间样品症状观察及采样 | 第25页 |
| 2.2 Dot-ELISA检测结果 | 第25-26页 |
| 2.3 RSVp3基因克隆及系统进化分析 | 第26-27页 |
| 2.4 RSVp3基因原核表达载体构建 | 第27-28页 |
| 2.5 RSVp3的抗血清制备 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 p3基因表达影响本氏烟内源基因表达 | 第31-43页 |
| 1 材料和方法 | 第31-34页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.2 试剂 | 第31页 |
| 1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 1.4 DNA提取 | 第31-32页 |
| 1.5 RNA提取 | 第32页 |
| 1.6 Northernblot检测 | 第32-33页 |
| 1.7 Westernblot检测 | 第33页 |
| 1.8 GO功能注释 | 第33页 |
| 1.9 KEGG功能富集 | 第33-34页 |
| 1.10 RT-qPCR验证 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.1 转p3本氏烟和野生型本氏烟表型观察 | 第34-35页 |
| 2.2 转p3本氏烟中p3基因的DNA检测 | 第35页 |
| 2.3 Northernblot检测转基因本氏烟 | 第35-36页 |
| 2.4 Westernblot检测转基因本氏烟 | 第36页 |
| 2.5 转录组分析 | 第36-37页 |
| 2.6 转录组中的差异表达基因 | 第37-38页 |
| 2.7 GO功能注释 | 第38-39页 |
| 2.8 KEGG富集 | 第39-40页 |
| 2.9 RT-qPCR验证 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 候选基因参与病毒症状形成的功能鉴定 | 第43-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 1.1 材料 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 引物的设计和合成 | 第43-44页 |
| 1.4 农杆菌感受态细胞的制备、转化和浸润接种 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-51页 |
| 2.1 沉默载体构建及农杆菌侵染症状观察 | 第45-47页 |
| 2.2 沉默效果的RT-qPCR验证 | 第47页 |
| 2.3 过表达载体构建及农杆菌侵染症状观察 | 第47-49页 |
| 2.4 过表达效果的RT-qPCR验证 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 结论和展望 | 第53-55页 |
| 1 结论 | 第53页 |
| 2 展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
