| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 蛋白质糖基化概述 | 第8-9页 |
| 1.2 N-糖基化过程 | 第9页 |
| 1.3 多萜醇寡糖前体合成途径 | 第9-11页 |
| 1.4 国内外多萜醇寡糖前体合成途径体外研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4.1 多萜醇寡糖前体合成途径中底物的选择 | 第11-12页 |
| 1.4.2 多萜醇寡糖前体合成途径中糖基转移酶的表达 | 第12-13页 |
| 1.5 本论文的研究意义和主要内容 | 第13-15页 |
| 1.5.1 本论文的研究意义 | 第13-14页 |
| 1.5.2 本论文的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 引物 | 第15页 |
| 2.1.2 菌株 | 第15页 |
| 2.1.3 质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.5 溶液配置 | 第16-19页 |
| 2.1.6 主要仪器与设备 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 基因检索和蛋白质结构分析 | 第19-20页 |
| 2.2.2 目的基因获取 | 第20页 |
| 2.2.3 质粒构建 | 第20-22页 |
| 2.2.4 质粒定点突变 | 第22-23页 |
| 2.2.5 Alg11_(45?548）的表达和纯化 | 第23页 |
| 2.2.6 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第23-24页 |
| 2.2.7 蛋白透析浓缩 | 第24页 |
| 2.2.8 Alg1ΔTM的表达和纯化 | 第24页 |
| 2.2.9 TRX-Alg2和hAlg11的表达和膜制备 | 第24页 |
| 2.2.10 Alg11_(45?548）蛋白活性测定 | 第24-25页 |
| 2.2.11 底物PPGn_2M_3的萃取 | 第25页 |
| 2.2.12 糖链的提取 | 第25页 |
| 2.2.13 液质联用分析糖链 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-41页 |
| 3.1 糖基转移酶Alg11的表达与纯化 | 第27-29页 |
| 3.1.1 糖基转移酶Alg11表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.2 诱导条件对蛋白表达的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.3 糖基转移酶Alg11_(45?548）的纯化 | 第29页 |
| 3.2 糖基转移酶Alg11活性分析 | 第29-33页 |
| 3.2.1 底物PPGn_2M_3的生成 | 第29-31页 |
| 3.2.2Alg11_(45?548）体外催化生成PPGn_2M_5 | 第31-33页 |
| 3.3 糖基转移酶Alg11酶学性质的研究 | 第33-39页 |
| 3.3.1 不同反应条件对酶学性质的研究 | 第33-35页 |
| 3.3.2 底物受体特异性对酶学性质的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.3 关键氨基酸序列和突变体活性分析 | 第36-38页 |
| 3.3.4 Alg1、Alg2和Alg11三种糖基转移酶的催化顺序 | 第38-39页 |
| 3.4 液质联用定量分析先天性糖基化疾病严重程度 | 第39-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的文章 | 第49页 |
