| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 睾丸间质细胞的生物学功能 | 第10-14页 |
| 1.1 形态及功能 | 第10页 |
| 1.2 影响睾酮分泌的因素 | 第10-13页 |
| 1.2.1 激素的调节作用 | 第11页 |
| 1.2.2 细胞因子的调节作用 | 第11-13页 |
| 1.3 睾丸间质细胞的凋亡 | 第13-14页 |
| 1.3.1 Bcl-2基因家族 | 第13页 |
| 1.3.2 caspase-3 | 第13页 |
| 1.3.3 Fas基因 | 第13-14页 |
| 1.3.4 SCF/c-kit | 第14页 |
| 2 睾丸间质细胞的体外培养 | 第14-16页 |
| 2.1 睾丸间质细胞的分离纯化 | 第14-15页 |
| 2.2 鉴定 | 第15页 |
| 2.2.1 3β-HSD染色鉴定 | 第15页 |
| 2.2.2 PCR鉴定法 | 第15页 |
| 2.3 睾丸间质细胞的保存及生物学功能的延续 | 第15-16页 |
| 3 黄芪抗衰老的作用机制 | 第16-18页 |
| 3.1 细胞衰老的机制 | 第16页 |
| 3.2 黄芪的抗氧化作用 | 第16-17页 |
| 3.3 对调控衰老相关基因的影响 | 第17-18页 |
| 3.3.1 Bcl-2基因家族 | 第17页 |
| 3.3.2 Fas配体和Fas受体 | 第17页 |
| 3.3.3 p16基因 | 第17-18页 |
| 第二章 大鼠睾丸间质细胞的收集纯化及鉴定 | 第18-22页 |
| 1 材料与方法 | 第18-19页 |
| 1.1 试验动物及其采样 | 第18页 |
| 1.2 主要仪器及试剂配制 | 第18-19页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第18页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.2.3 试剂的配制 | 第19页 |
| 2 试验方法 | 第19-20页 |
| 2.1 大鼠睾丸间质细胞的收集纯化 | 第19-20页 |
| 2.1.1 大鼠睾丸间质细胞的收集 | 第19页 |
| 2.1.2 活细胞计数 | 第19-20页 |
| 2.1.3 大鼠睾丸间质细胞的纯化 | 第20页 |
| 2.2 大鼠睾丸间质细胞的鉴定 | 第20页 |
| 3 结果与分析 | 第20页 |
| 3.1 大鼠睾丸间质细胞3β-HSD染色鉴定结果 | 第20页 |
| 4 讨论 | 第20-22页 |
| 第三章 黄芪提取液对大鼠睾丸间质细胞体外培养的影响 | 第22-36页 |
| 1 材料与方法 | 第22-23页 |
| 1.1 试验动物及其采样 | 第22页 |
| 1.2 主要仪器及试剂配制 | 第22-23页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第22-23页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.2.3 试剂的配制 | 第23页 |
| 2 试验方法 | 第23-29页 |
| 2.1 大鼠睾丸间质细胞的收集纯化及鉴定 | 第23页 |
| 2.2 大鼠睾丸间质细胞的培养 | 第23-24页 |
| 2.3 大鼠睾丸间质细胞增殖测定 | 第24页 |
| 2.4 大鼠睾丸间质细胞睾酮浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.4.1 标准品的稀释 | 第24页 |
| 2.4.2 样品的添加 | 第24-25页 |
| 2.4.3 温育 | 第25页 |
| 2.4.4 配液 | 第25页 |
| 2.4.5 洗涤 | 第25页 |
| 2.4.6 加酶 | 第25页 |
| 2.4.7 温育 | 第25页 |
| 2.4.8 洗涤 | 第25页 |
| 2.4.9 显色 | 第25页 |
| 2.4.10 终止 | 第25页 |
| 2.4.11 测定 | 第25页 |
| 2.5 大鼠睾丸间质细胞总SOD活性测定 | 第25-26页 |
| 2.5.1 细胞样品准备 | 第25-26页 |
| 2.5.2 WST工作液的配制 | 第26页 |
| 2.5.3 酶工作液的配制 | 第26页 |
| 2.5.4 样品测定 | 第26页 |
| 2.6 大鼠睾丸间质细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性测定 | 第26-27页 |
| 2.6.1 细胞样品的准备 | 第26页 |
| 2.6.2 10 mM NADPH的配制 | 第26页 |
| 2.6.3 84 mM GSH溶液的配制 | 第26页 |
| 2.6.4 GPx检测工作液的配制 | 第26页 |
| 2.6.5 15 mM过氧化物试剂溶液的配制 | 第26页 |
| 2.6.6 样品的测定 | 第26-27页 |
| 2.7大鼠睾丸间质细胞抑癌基因P53及调亡基因bax和bcl-2的表达 | 第27-29页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.7.2 睾丸间质细胞总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.7.3 睾丸间质细胞总RNA完整性鉴定 | 第28页 |
| 2.7.4 睾丸间质细胞总RNA内基因组DNA的去除 | 第28页 |
| 2.7.5 反转录反应 | 第28-29页 |
| 2.7.6 qRT-PCR | 第29页 |
| 2.8统计分析方法 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-34页 |
| 3.1 黄芪提取液对大鼠睾丸间质细胞増殖的影响 | 第29-30页 |
| 3.2 黄芪提取液对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响 | 第30-31页 |
| 3.3 黄芪提取液对大鼠睾丸间质细胞总SOD活性的影响 | 第31页 |
| 3.4 黄芪提取液对大鼠睾丸间质细胞GSH-Px活性的影响 | 第31-32页 |
| 3.5 黄芪提取液对抑癌基因P53及调亡基因Bax、Bal-2表达的影响 | 第32-34页 |
| 3.5.1 内参基因β-actin伽及各目的基因的扩增曲线及溶解曲线 | 第32-34页 |
| 3.5.2 间质细胞内P53、Bax、Bal-2 mRNA表达差异 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 全文结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| Abstract | 第42页 |
| 附录 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
