| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第10-11页 |
| 1.1.1 课题背景及来源 | 第10页 |
| 1.1.2 研究的目的及意义 | 第10-11页 |
| 1.2 组蛋白甲基化和去甲基化酶 | 第11-13页 |
| 1.2.1 组蛋白甲基化 | 第11-12页 |
| 1.2.2 组蛋白去甲基化酶 | 第12-13页 |
| 1.3 KDM5C及其研究进展 | 第13-16页 |
| 1.3.1 KDM5C概述 | 第13-14页 |
| 1.3.2 KDM5C与组蛋白表观修饰研究 | 第14-15页 |
| 1.3.3 KDM5C与癌症关系研究 | 第15-16页 |
| 1.3.4 KDM5C研究进展 | 第16页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9基因编辑系统 | 第16-18页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9概述 | 第16-17页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9的应用 | 第17-18页 |
| 1.5 主要研究内容及技术路线 | 第18-21页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第19-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验菌株,载体,细胞系及组织样品 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂及仪器 | 第21-23页 |
| 2.1.3 实验分析软件及网站 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 实验所需肝癌组织样品的获取 | 第24页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 RNA反转录与实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.2.4 组织样品的包埋和切片 | 第26-28页 |
| 2.2.5 苏木精-伊红染色(HE染色) | 第28-29页 |
| 2.2.6 免疫组化 | 第29-30页 |
| 2.2.7 免疫荧光 | 第30页 |
| 2.2.8 细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.2.9 KDM5C敲除载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.10 细胞转染与单克隆筛选 | 第34页 |
| 2.2.11 WesternBlot | 第34-36页 |
| 2.2.12 MTT增殖实验 | 第36页 |
| 2.2.13 细胞平板克隆形成实验 | 第36-37页 |
| 2.2.14 细胞周期与凋亡实验 | 第37页 |
| 2.2.15 细胞划痕实验 | 第37-38页 |
| 2.2.16 细胞迁移和侵袭实验 | 第38-39页 |
| 第3章 KDM5C在肝癌组织中的表达及敲除细胞系的构建 | 第39-51页 |
| 3.1 引言 | 第39-40页 |
| 3.2 KDM5C在肝癌组织中的表达 | 第40页 |
| 3.3 苏木精-伊红染色观察肝癌组织分型 | 第40-41页 |
| 3.4 KDM5C在肝癌组织细胞中的定位 | 第41-44页 |
| 3.4.1 KDM5C在肝癌组织中的定位 | 第41-43页 |
| 3.4.2 KDM5C在肝癌细胞中的定位 | 第43-44页 |
| 3.5 KDM5C敲除载体的构建 | 第44-48页 |
| 3.5.1 敲除靶点的选择和载体构建 | 第44-45页 |
| 3.5.2 单克隆鉴定 | 第45-46页 |
| 3.5.3 敲除细胞系的建立 | 第46-47页 |
| 3.5.4 蛋白水平检测敲除效率 | 第47-48页 |
| 3.6 讨论 | 第48-50页 |
| 3.7 本章小结 | 第50-51页 |
| 第4章 KDM5C敲除对HepG2细胞生物学特性的影响 | 第51-60页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 KDM5C敲除对HepG2细胞生物学特性的影响 | 第51-59页 |
| 4.2.1 KDM5C敲除对HepG2细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 4.2.2 KDM5C敲除对HepG2细胞克隆形成能力的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.3 KDM5C敲除对HepG2细胞周期的影响 | 第53-55页 |
| 4.2.4 KDM5C敲除对HepG2细胞凋亡的影响 | 第55页 |
| 4.2.5 KDM5C敲除对HepG2细胞迁移的影响 | 第55-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
