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应用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立差异甲基化区CGI-2敲除小鼠

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
第1章 绪论第9-24页
    1.1 课题背景及研究目的和意义第9-12页
    1.2 对小鼠Dlk1-Dio3印记区间的相关研究第12-15页
        1.2.1 Dlk1-Dio3印记区间的相关介绍第12-13页
        1.2.2 Dlk1-Dio3印记区间的相关调控作用第13-14页
        1.2.3 Dlk1-Dio3印记区间中已知的差异甲基化区的研究第14-15页
    1.3 CRISPR/Cas9的相关研究第15-21页
        1.3.1 CRISPR/Cas9技术的原理简介第15-16页
        1.3.2 CRISPR/Cas9的国内外研究现状第16-19页
        1.3.3 有关CRISPR/Cas9技术的相关应用第19-21页
    1.4 显微操作技术的相关介绍第21-23页
    1.5 本研究的主要研究内容及技术路线第23-24页
第2章 实验材料与方法第24-41页
    2.1 实验材料第24-27页
        2.1.1 实验动物第24页
        2.1.2 实验试剂与试剂盒第24-25页
        2.1.3 主要实验仪器第25-26页
        2.1.4 主要试剂的配置第26-27页
        2.1.5 生物信息学网站及数据分析软件第27页
    2.2 实验方法第27-41页
        2.2.1 显微注射用sgRNA的获得第27-29页
        2.2.2 sgRNA和Cas9mRNA的体外转录第29页
        2.2.3 假孕母鼠的获得第29-30页
        2.2.4 用于显微注射的受精卵的获得第30-31页
        2.2.5 显微注射第31-32页
        2.2.6 胚胎的体外培养第32页
        2.2.7 胚胎移植第32-33页
        2.2.8 术后母鼠的饲养第33页
        2.2.9 着床前胚胎总RNA的提取第33页
        2.2.10 逆转录cDNA第33-34页
        2.2.11 组织DNA的提取第34-35页
        2.2.12 敲除小鼠的鉴定第35-38页
        2.2.13 小鼠组织的石蜡切片第38-40页
        2.2.14 HE染色第40-41页
第3章 实验结果第41-55页
    3.1 CGI-2敲除小鼠的获得第41-49页
        3.1.1 sgRNA的设计与合成第41-42页
        3.1.2 Cas9mRNA的获得第42页
        3.1.3 用于显微注射的受精卵的获得第42-43页
        3.1.4 受精卵显微注射和体外培养第43页
        3.1.5 胚胎移植及阳性小鼠鉴定第43-46页
        3.1.6 CGI-2双等位敲除小鼠的获得第46-47页
        3.1.7 新生鼠的鉴定第47-49页
    3.2 ICR品系CGI-2双等位敲除鼠的获得及初步分析第49-52页
        3.2.1 ICR品系CGI-2双等位敲除鼠的获得第49-50页
        3.2.2 CGI-2敲除小鼠体重的初步分析第50页
        3.2.3 CGI-2敲除小鼠体征的初步分析第50-51页
        3.2.4 CGI-2敲除小鼠组织形态的初步分析第51-52页
    3.3 讨论第52-55页
第4章 结论第55-56页
参考文献第56-64页
附录一第64-65页
附录二第65-67页
致谢第67页

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