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人源溶菌酶在毕赤酵母中的高效表达

摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 前言第7-17页
    1.1 溶菌酶概述第7-11页
        1.1.1 溶菌酶的起源第7页
        1.1.2 溶菌酶的分类第7-8页
        1.1.3 溶菌酶催化机制第8-9页
        1.1.4 溶菌酶的应用第9-10页
        1.1.5 提取法生产溶菌酶现状第10-11页
        1.1.6 重组人源溶菌酶研究现状第11页
    1.2 毕赤酵母表达系统简介第11-16页
        1.2.1 毕赤酵母的发展历史第11-12页
        1.2.2 毕赤酵母表达系统启动子类型第12页
        1.2.3 毕赤酵母甲醇利用表型及代谢方式第12-13页
        1.2.4 毕赤酵母表达系统的特点第13-14页
        1.2.5 毕赤酵母表达载体的结构特点第14-15页
        1.2.6 毕赤酵母表达溶菌酶研究现状第15-16页
    1.3 本论文主要研究内容第16-17页
第二章 材料与方法第17-25页
    2.1 材料第17-18页
        2.1.1 菌株和载体第17页
        2.1.2 分子生物学相关试剂第17页
        2.1.3 通用引物第17页
        2.1.4 同尾酶第17-18页
        2.1.5 培养基及试剂第18页
        2.1.6 仪器设备第18页
    2.2 实验方法第18-25页
        2.2.1 pPICZ-OptαF/EhnαF+hLYZ重组表达载体的构建第18-19页
        2.2.2 多拷贝串联hLYZ基因表达载体的构建第19-20页
        2.2.3 重组表达载体对大肠杆菌的转化筛选第20-21页
        2.2.4 重组表达载体对毕赤酵母的转化及鉴定第21-22页
        2.2.5 重组菌株诱导表达第22-23页
        2.2.6 hLYZ蛋白产量分析及活力检测第23-24页
        2.2.7 OUR、CER计算公式第24页
        2.2.8 毕赤酵母菌浓测定第24-25页
第三章 结果与讨论第25-41页
    3.1 hLYZ重组工程菌的构建及表达第25-29页
        3.1.1 信号肽和溶菌酶基因序列的整体优化第25页
        3.1.2 整体优化重组表达载体的构建第25-26页
        3.1.3 毕赤酵母的转化及筛选第26页
        3.1.4 整体优化重组子摇瓶诱导表达结果第26-28页
        3.1.5 整体优化重组子5L发酵罐诱导表达结果第28-29页
    3.2 增长信号肽强化hLYZ表达第29-35页
        3.2.1 增长信号肽的优化设计第29-30页
        3.2.2 .增长信号肽重组表达载体的构建及转化筛选第30-31页
        3.2.3 增长信号肽重组子摇瓶诱导表达结果第31-32页
        3.2.4 增长信号肽重组子5L发酵罐诱导表达结果第32-33页
        3.2.5 探究不同诱导策略下K4表达hLYZ的性能第33-35页
    3.3 多拷贝串联hLYZ基因重组工程菌的构建及表达第35-39页
        3.3.1 多拷贝串联hLYZ基因表达载体的构建第35-36页
        3.3.2 多拷贝串联hLYZ基因表达载体的转化及筛选第36-37页
        3.3.3 多拷贝串联hLYZ基因转化重组子摇瓶诱导表达结果第37页
        3.3.4 多拷贝串联hLYZ基因转化重组子5L发酵罐诱导表达结果第37-39页
    3.4 讨论第39-41页
主要结论与展望第41-42页
    主要结论第41页
    展望第41-42页
致谢第42-43页
参考文献第43-48页
附录第48-54页
    附录一:实验相关试剂配制第48-54页
    附录二:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第54页

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