| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第7-17页 |
| 1.1 溶菌酶概述 | 第7-11页 |
| 1.1.1 溶菌酶的起源 | 第7页 |
| 1.1.2 溶菌酶的分类 | 第7-8页 |
| 1.1.3 溶菌酶催化机制 | 第8-9页 |
| 1.1.4 溶菌酶的应用 | 第9-10页 |
| 1.1.5 提取法生产溶菌酶现状 | 第10-11页 |
| 1.1.6 重组人源溶菌酶研究现状 | 第11页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统简介 | 第11-16页 |
| 1.2.1 毕赤酵母的发展历史 | 第11-12页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达系统启动子类型 | 第12页 |
| 1.2.3 毕赤酵母甲醇利用表型及代谢方式 | 第12-13页 |
| 1.2.4 毕赤酵母表达系统的特点 | 第13-14页 |
| 1.2.5 毕赤酵母表达载体的结构特点 | 第14-15页 |
| 1.2.6 毕赤酵母表达溶菌酶研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3 本论文主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-25页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第17页 |
| 2.1.2 分子生物学相关试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 通用引物 | 第17页 |
| 2.1.4 同尾酶 | 第17-18页 |
| 2.1.5 培养基及试剂 | 第18页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 pPICZ-OptαF/EhnαF+hLYZ重组表达载体的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.2 多拷贝串联hLYZ基因表达载体的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 重组表达载体对大肠杆菌的转化筛选 | 第20-21页 |
| 2.2.4 重组表达载体对毕赤酵母的转化及鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.5 重组菌株诱导表达 | 第22-23页 |
| 2.2.6 hLYZ蛋白产量分析及活力检测 | 第23-24页 |
| 2.2.7 OUR、CER计算公式 | 第24页 |
| 2.2.8 毕赤酵母菌浓测定 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-41页 |
| 3.1 hLYZ重组工程菌的构建及表达 | 第25-29页 |
| 3.1.1 信号肽和溶菌酶基因序列的整体优化 | 第25页 |
| 3.1.2 整体优化重组表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 毕赤酵母的转化及筛选 | 第26页 |
| 3.1.4 整体优化重组子摇瓶诱导表达结果 | 第26-28页 |
| 3.1.5 整体优化重组子5L发酵罐诱导表达结果 | 第28-29页 |
| 3.2 增长信号肽强化hLYZ表达 | 第29-35页 |
| 3.2.1 增长信号肽的优化设计 | 第29-30页 |
| 3.2.2 .增长信号肽重组表达载体的构建及转化筛选 | 第30-31页 |
| 3.2.3 增长信号肽重组子摇瓶诱导表达结果 | 第31-32页 |
| 3.2.4 增长信号肽重组子5L发酵罐诱导表达结果 | 第32-33页 |
| 3.2.5 探究不同诱导策略下K4表达hLYZ的性能 | 第33-35页 |
| 3.3 多拷贝串联hLYZ基因重组工程菌的构建及表达 | 第35-39页 |
| 3.3.1 多拷贝串联hLYZ基因表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.2 多拷贝串联hLYZ基因表达载体的转化及筛选 | 第36-37页 |
| 3.3.3 多拷贝串联hLYZ基因转化重组子摇瓶诱导表达结果 | 第37页 |
| 3.3.4 多拷贝串联hLYZ基因转化重组子5L发酵罐诱导表达结果 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-42页 |
| 主要结论 | 第41页 |
| 展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录 | 第48-54页 |
| 附录一:实验相关试剂配制 | 第48-54页 |
| 附录二:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
