| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 课题研究的背景和意义 | 第9-10页 |
| 1.2 超级增强子的简介及作用机制 | 第10-15页 |
| 1.2.1 超级增强子的简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 超级增强子的作用机制 | 第11-13页 |
| 1.2.3 超级增强子在肿瘤中的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 DUSP5研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 DUSP家族简介 | 第15-16页 |
| 1.3.2 DUSP5功能及研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第17-18页 |
| 1.4.1 确定超级增强子的核心组分 | 第17页 |
| 1.4.2 靶基因的预测与鉴定 | 第17-18页 |
| 1.4.3 DUSP5-SE对细胞生物学特性的影响 | 第18页 |
| 1.5 技术路线图 | 第18-19页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料试剂 | 第19-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19-22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 其他实验试剂及材料 | 第22页 |
| 2.2 实验方法和步骤 | 第22-30页 |
| 2.2.1 细胞传代培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 细胞复苏和冻存 | 第23-24页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.5 基因组DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 PCR及实时荧光定量PCR | 第27页 |
| 2.2.7 双荧光素酶基因报告系统实验 | 第27-28页 |
| 2.2.8 PCR产物纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.9 构建稳转细胞系 | 第29页 |
| 2.2.10 划痕实验 | 第29-30页 |
| 2.2.11 MTT增殖实验 | 第30页 |
| 2.2.12 克隆形成实验 | 第30页 |
| 2.3 实验分析使用网站及软件 | 第30-31页 |
| 2.4 统计学分析 | 第31-32页 |
| 第3章 超级增强子的来源及组分鉴定 | 第32-38页 |
| 3.1 基于生物信息学筛选的超级增强子 | 第32-33页 |
| 3.2 双荧光报告系统确定超级增强子核心组分 | 第33-36页 |
| 3.2.1 组分增强子的确定 | 第33-34页 |
| 3.2.2 组分增强子活性检测 | 第34-36页 |
| 3.3 讨论 | 第36-37页 |
| 3.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第4章 DUSP5-SE靶基因的初步探究 | 第38-44页 |
| 4.1 DUSP5-SE靶基因预测 | 第38-39页 |
| 4.2 瞬时敲低DUSP5-SE对靶基因进行初步验证 | 第39-42页 |
| 4.2.1 Crispr-Cas9敲除载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.2.2 瞬时转染DUSP5-SE敲除载体靶基因检测 | 第40-42页 |
| 4.3 讨论 | 第42-43页 |
| 4.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第5章 DUSP5-SE对生物学特性的影响 | 第44-53页 |
| 5.1 建立DUSP5-SE稳定敲除或敲低细胞系 | 第44-47页 |
| 5.1.1 建立DUSP5-SE稳定敲除或敲低细胞系流程 | 第44-45页 |
| 5.1.2 建立DUSP5-SE敲低的HCT116细胞系 | 第45-46页 |
| 5.1.3 建立DUSP5-SE敲除和敲低的HeLa细胞系 | 第46-47页 |
| 5.2 稳定敲除或敲低DUSP5-SE细胞系靶基因检测 | 第47-49页 |
| 5.2.1 稳定敲除和敲低DUSP5-SE的HeLa细胞系靶基因检测 | 第47-48页 |
| 5.2.2 稳定敲低DUSP5-SE的HCT116细胞系靶基因检测 | 第48-49页 |
| 5.3 DUSP5-SE对HeLa及HCT116细胞生物学特性的影响 | 第49-51页 |
| 5.3.1 稳定敲除或敲低DUSP5-SE促进细胞增殖 | 第49页 |
| 5.3.2 稳定敲除或敲低DUSP5-SE不影响细胞迁移 | 第49页 |
| 5.3.3 稳定敲除或敲低DUSP5-SE不影响细胞克隆形成 | 第49-51页 |
| 5.4 讨论 | 第51页 |
| 5.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
