| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 英文缩略表 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第1章 酵母双杂交技术筛选相互作用蛋白 | 第12-31页 |
| 1.1 实验材料 | 第12-17页 |
| 1.1.1 菌株、细胞、载体 | 第12-14页 |
| 1.1.2 主要酶制剂、试剂盒、试剂 | 第14-15页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第15页 |
| 1.1.4 主要培养基和缓冲液的配制 | 第15-17页 |
| 1.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 1.2.1 PDBLeu-LOC诱饵载体的构建 | 第17-18页 |
| 1.2.2 PDBLeu-LOC诱饵质粒转化酵母及毒性、自激活检测 | 第18-20页 |
| 1.2.3 pDBLeu-loc作为诱饵筛选成人肝cDNA文库 | 第20-23页 |
| 1.2.4 阳性酵母菌落的鉴定 | 第23页 |
| 1.2.5 回转验证 | 第23页 |
| 1.3 结果 | 第23-30页 |
| 1.3.1 诱饵载体pDBLeu-loc构建 | 第23-24页 |
| 1.3.2 诱饵质粒pDBLeu-loc在MaV203酵母菌株中毒性及自激活检测 | 第24-25页 |
| 1.3.3 以pDBLeu-loc为诱饵筛选成人肝cDNA文库 | 第25-27页 |
| 1.3.4 阳性克隆质粒回转验证 | 第27-28页 |
| 1.3.5 阳性克隆猎物质粒测序与分析 | 第28-29页 |
| 1.3.6 阳性克隆文库质粒序列编码蛋白质的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 1.4 小结 | 第30-31页 |
| 第2章 LOC401296及相互作用蛋白的共定位 | 第31-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-35页 |
| 2.1.1 菌株、细胞、载体 | 第31页 |
| 2.1.2 主要酶制剂、试剂盒、试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要培养基和缓冲液的配制 | 第33-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-40页 |
| 2.2.1 pEGFP-GRN、pEGFP-PLSCR1、pEGFP-N4BP2L2载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.2 GRN、PLSCR1、N4BP2L2的pEGFP融合质粒在HEK293细胞中表达 | 第37-39页 |
| 2.2.3 细胞免疫荧光和激光共聚焦技术观察三个蛋白与LOC401296共定位 | 第39-40页 |
| 2.3 结果 | 第40-50页 |
| 2.3.1 pEGFP-GRN、pEGFP -PLSCR1、pEGFP -N4BP2L2载体的构建 | 第40-44页 |
| 2.3.2 Western Blot检测pEGFP-GRN、pEGFP-PLSCR1、pEGFP-N4BP2L2在HEK293细胞中蛋白表达 | 第44页 |
| 2.3.3 细胞免疫荧光和激光共聚焦技术观察三个蛋白与LOC401296的定位 | 第44-50页 |
| 2.4 小结 | 第50-52页 |
| 第3章 讨论 | 第52-56页 |
| 3.1 ProquestTM Two-Hybrid System的优势 | 第52-53页 |
| 3.2 颗粒蛋白（GRN） | 第53页 |
| 3.3 磷脂爬行酶 1（PLSCR1） | 第53页 |
| 3.4 Notch3 | 第53-54页 |
| 3.5 表皮生长因子样结构域 7（EGFL7） | 第54页 |
| 3.6 纤维粘连蛋白-1（FN1） | 第54页 |
| 3.7 隐性TGF-β 结合蛋白-3（LTBP3） | 第54-55页 |
| 3.8 ADAMTS-L4 | 第55页 |
| 3.9 N4BP2L2 | 第55-56页 |
| 3.10 LOC401296蛋白质相互作用网络的构建 | 第56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 第4章 综述 | 第61-72页 |
| 4.1 相互作用蛋白组学在系统生物学中的地位 | 第61-62页 |
| 4.1.1 蛋白质相互作用的核心作用 | 第61-62页 |
| 4.2 筛选相互作用蛋白的方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 酵母双杂交技术 | 第62-63页 |
| 4.2.2 亲和纯化偶联质谱法 | 第63-64页 |
| 4.2.3 酵母双杂交和亲和纯化偶联质谱法的比较 | 第64页 |
| 4.3 体内的相互作用-酵母双杂交技术 | 第64-69页 |
| 4.3.1 酵母双杂交技术的原理 | 第64-66页 |
| 4.3.2 现有酵母双杂交系统及其优势 | 第66-68页 |
| 4.3.3 酵母双杂交系统的局限性 | 第68-69页 |
| 4.4 小结 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 导师简介 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75-76页 |
| 学位论文数据集 | 第76页 |
