摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
第一章 绪论 | 第11-20页 |
1.1 引言 | 第11页 |
1.2 研究进展 | 第11-18页 |
1.2.1 基因组定向修饰方法概述 | 第11-13页 |
1.2.2 基因组定向修饰检测策略 | 第13-15页 |
1.2.3 SSCP分型技术及其应用 | 第15-18页 |
1.3 立题依据及意义 | 第18-19页 |
1.4 研究内容及技术路线 | 第19-20页 |
1.4.1 研究内容 | 第19页 |
1.4.2 技术路线 | 第19-20页 |
第二章 材料与方法 | 第20-32页 |
2.1 实验材料 | 第20页 |
2.1.1 植物材料 | 第20页 |
2.1.2 质粒和菌株 | 第20页 |
2.2 实验试剂与配制 | 第20-22页 |
2.3 实验仪器 | 第22页 |
2.4 实验方法 | 第22-32页 |
2.4.1 目标位点系列突变模型获取 | 第22-23页 |
2.4.2 大肠杆菌DH5α 感受态制备 | 第23页 |
2.4.3 大肠杆菌转化与培养 | 第23-24页 |
2.4.4 质粒DNA提取、酶切验证及连接 | 第24-26页 |
2.4.5 PCR扩增通用体系 | 第26-27页 |
2.4.6 SSCP分型方法实验步骤 | 第27-28页 |
2.4.7 水稻原生质体制备与转化 | 第28-30页 |
2.4.8 农杆菌介导的水稻转化 | 第30页 |
2.4.9 水稻基因组DNA提取及目标位点检测 | 第30-31页 |
2.4.10 SSCP分型法检测水稻基因组定向修饰位点 | 第31-32页 |
第三章 结果与分析 | 第32-49页 |
3.1 目标位点系列突变模型验证 | 第32页 |
3.2 SSCP分型体系建立及条件优化 | 第32-37页 |
3.2.1 8% PAGE胶(19:1)在不同电泳条件下电泳结果 | 第33-34页 |
3.2.2 12% PAGE胶(19:1)在不同电泳条件下电泳结果 | 第34-36页 |
3.2.3 15% PAGE胶(29:1)在不同电泳条件下电泳结果 | 第36-37页 |
3.3 重复性实验 | 第37-38页 |
3.4 灵敏度分析 | 第38-39页 |
3.5 灵敏度比较 | 第39-40页 |
3.6 影响SSCP检出效率主要因素 | 第40-43页 |
3.7 水稻内源基因修饰位点SSCP分型检测 | 第43-49页 |
3.7.1 水稻原生质体突变位点检测 | 第43-45页 |
3.7.2 水稻稳定转化突变体单株检测 | 第45-49页 |
第四章 讨论 | 第49-51页 |
4.1 影响SSCP分型技术可靠性及灵敏度的主要因素 | 第49页 |
4.2 基于SSCP分型的植物基因组定向修饰检测体系的应用范围 | 第49-51页 |
第五章 结论 | 第51-53页 |
5.1 总结 | 第51页 |
5.2 创新点 | 第51页 |
5.3 展望 | 第51-53页 |
致谢 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-60页 |
攻硕期间取得的研究成果 | 第60-61页 |