| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| 1.1 选题来源 | 第9页 |
| 1.2 天冬氨酸激酶概述 | 第9-11页 |
| 1.3 天冬氨酸激酶国内外研究现状及进展 | 第11-12页 |
| 1.3.1 天冬氨酸激酶国内研究进展 | 第11页 |
| 1.3.2 天冬氨酸激酶国外研究进展 | 第11-12页 |
| 1.4 谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）中AK | 第12-14页 |
| 1.5 本研究的基本内容 | 第14页 |
| 1.6 本研究目的意义及创新点 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 试剂和培养基2.1.3 相关缓冲液配制 | 第15-16页 |
| 2.1.3 相关缓冲液配制 | 第16-17页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 突变位点的确定 | 第17-18页 |
| 2.2.2 重组质粒提取 | 第18页 |
| 2.2.3 AK基因验证 | 第18页 |
| 2.2.4 饱和定点突变及高通量引物设计 | 第18-19页 |
| 2.2.5 E. coli（BL21）感受态细胞制备及质粒转化 | 第19页 |
| 2.2.6 突变株初筛 | 第19页 |
| 2.2.7 突变体AK粗酶液制备 | 第19-20页 |
| 2.2.8 AK粗酶液纯化 | 第20页 |
| 2.2.9 AK酶活力测定 | 第20页 |
| 2.2.10 考马斯亮蓝方法测定AK总蛋白含量 | 第20-21页 |
| 2.2.11 Western Blotting验证 | 第21-22页 |
| 2.2.12 AK酶动力学研究 | 第22页 |
| 2.2.13 酶学性质研究 | 第22-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-36页 |
| 3.1 M372、G377和V378突变位点确定 | 第23页 |
| 3.2 突变PCR及AK基因验证 | 第23-24页 |
| 3.3 突变结果 | 第24-25页 |
| 3.4 SDS-PAGE和Western blotting | 第25页 |
| 3.5 突变体AK的动力学分析 | 第25-28页 |
| 3.6 最适温度和最适pH对M372I AK、G377F AK和V378F AK活力影响 | 第28-29页 |
| 3.7 酶活力稳定性研究 | 第29-30页 |
| 3.8 不同金属离子对AK活力的影响 | 第30-32页 |
| 3.9 不同有机溶剂对AK活力的影响 | 第32-34页 |
| 3.10 底物抑制剂对AK活力的影响 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| 4.1 M372I AK | 第36-37页 |
| 4.2 G377F AK | 第37-38页 |
| 4.3 V378F AK | 第38-40页 |
| 5 结论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 作者简介 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
