| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 土壤重金属铜污染现状 | 第14页 |
| 1.1.1 土壤重金属铜污染的来源 | 第14页 |
| 1.1.2 土壤重金属铜对微生物的危害 | 第14页 |
| 1.2 生物细胞铜代谢机制研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 铜离子的危害机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 细胞对铜离子胁迫的应答机制 | 第15页 |
| 1.2.3 铜离子的摄入 | 第15页 |
| 1.2.4 铜离子的转运和储存 | 第15-17页 |
| 1.2.5 铜离子的释放 | 第17页 |
| 1.3 木霉菌研究概况 | 第17-19页 |
| 1.3.1 木霉菌的生防机制 | 第17-18页 |
| 1.3.2 木霉菌土壤重金属修复研究概况 | 第18页 |
| 1.3.3 木霉菌铜代谢机制研究概况 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的和内容 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 哈茨木霉thmea1的克隆与分析 | 第21-30页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 供试菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21页 |
| 2.1.4 引物 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 thmea1的克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.2 thmea1拷贝数的验证 | 第23-25页 |
| 2.2.3 thmea1生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 thmea1的克隆 | 第25-26页 |
| 2.3.2 thmea1拷贝数验证 | 第26-28页 |
| 2.3.3 thmea1生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 哈茨木霉thmea1敲除突变株的获得及验证 | 第30-40页 |
| 3.1 材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 供试菌株和质粒 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 培养基及相关溶液 | 第30-31页 |
| 3.1.4 引物 | 第31页 |
| 3.2 方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 thmea1敲除载体pKH-KO-△thmea1的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.2 pKH-KO-△thmea1载体的验证 | 第32页 |
| 3.2.3 PEG介导pKH-KO-△thmea1原生质体转化 | 第32-33页 |
| 3.2.4 thmea1敲除转化子的筛选和验证 | 第33-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 pKH-KO-△thmea1的验证 | 第35-36页 |
| 3.3.2 thmea1敲除突变株转化子的获得 | 第36-37页 |
| 3.3.3 thmea1敲除突变株的筛选与验证 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 哈茨木霉thmea1过表达突变株的获得及验证 | 第40-49页 |
| 4.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.1 供试菌株和质粒 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 引物 | 第40页 |
| 4.2 方法 | 第40-44页 |
| 4.2.1 thmea1过表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 4.2.2 thmea1过表达载体的验证 | 第43页 |
| 4.2.3 PEG介导pKH-KO-Othmea1原生质体转化 | 第43-44页 |
| 4.2.4 thmea1过表达转化子的筛选和验证 | 第44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 4.3.1 pKH-KO-Othmea1载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.3.2 pKH-KO-Othmea1载体的验证 | 第45-46页 |
| 4.3.3 thmea1过表达突变株的验证 | 第46-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 野生菌Th33及其突变株相关生物学性状分析 | 第49-61页 |
| 5.1 材料 | 第49页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第49页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第49页 |
| 5.2 方法 | 第49-51页 |
| 5.2.1 Th33及其突变株的表型分析 | 第49页 |
| 5.2.2 Th33及其突变株生长速率及产孢量的比较 | 第49页 |
| 5.2.3 Th33及其突变株拮抗性比较 | 第49页 |
| 5.2.4 Th33及其突变株铜离子耐受性比较 | 第49-50页 |
| 5.2.5 Th33及其突变株铜离子吸附力比较 | 第50页 |
| 5.2.6 Th33及其突变株铜代谢相关基因的qRT-PCR分析 | 第50-51页 |
| 5.3 结果与分析 | 第51-59页 |
| 5.3.1 Th33及其突变株的菌落形态 | 第51-52页 |
| 5.3.2 Th33及其突变株生长速率及产胞量 | 第52页 |
| 5.3.3 Th33及其突变株拮抗性 | 第52-54页 |
| 5.3.4 Th33及其突变株铜离子耐受性 | 第54-56页 |
| 5.3.5 Th33及其突变株铜离子吸附力 | 第56-57页 |
| 5.3.6 铜代谢相关基因的qRT-PCR分析 | 第57-59页 |
| 5.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 野生菌TH33及敲除突变株转录组测序 | 第61-74页 |
| 6.1 材料 | 第61页 |
| 6.1.1 供试菌株 | 第61页 |
| 6.2 方法 | 第61-62页 |
| 6.2.1 样品的处理 | 第61页 |
| 6.2.2 总RNA的提取 | 第61页 |
| 6.2.3 cDNA文库构建和测序 | 第61页 |
| 6.2.4 基因注释和表达定量分析 | 第61页 |
| 6.2.5 转录组测序结果的qRT-PCR验证 | 第61-62页 |
| 6.2.6 差异表达基因分析 | 第62页 |
| 6.3 结果与分析 | 第62-73页 |
| 6.3.1 RNA的提取及测序文库的构建 | 第62-63页 |
| 6.3.2 原始测序数据质量评估 | 第63-65页 |
| 6.3.3 基因注释和表达定量分析 | 第65页 |
| 6.3.4 转录组测序结果的qRT-PCR验证 | 第65-67页 |
| 6.3.5 差异表达基因分析 | 第67页 |
| 6.3.6 差异表达基因GO(Gene Ontology)富集分析 | 第67-68页 |
| 6.3.7 差异表达基因KEGG Pathway富集分析 | 第68-69页 |
| 6.3.8 抗氧化酶类相关基因 | 第69-70页 |
| 6.3.9 核糖体、热激蛋白(HSP)及泛素相关基因 | 第70-73页 |
| 6.4 讨论 | 第73-74页 |
| 第七章 全文总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
