| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 原发性肝癌 | 第11页 |
| 1.2 HBV病毒与病毒蛋白HBx | 第11-12页 |
| 1.2.1 HBx病毒蛋白 | 第11-12页 |
| 1.2.2 HBx病毒蛋白在肝癌发生发展中的作用 | 第12页 |
| 1.3 TGF-β信号通路 | 第12-14页 |
| 1.3.1 TGF-β信号通路 | 第12-13页 |
| 1.3.2 Smad家族蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3.3 TGF-β信号通路与肿瘤发生发展密切相关 | 第14页 |
| 1.4 ADAM家族蛋白 | 第14-15页 |
| 1.5 HBx蛋白与TGF-β信号通路导致HBV相关性肝癌 | 第15页 |
| 1.6 本课题的研究目的和意义 | 第15-17页 |
| 第2章 HBx病毒蛋白与ADAM17在肝癌组织及细胞中异常表达 | 第17-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 临床样本 | 第17页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第17页 |
| 2.1.3 质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 细胞培养与冻存 | 第19-21页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第21-24页 |
| 2.2.3 质粒转染 | 第24页 |
| 2.2.4 肝组织免疫组织化学染色 | 第24-25页 |
| 2.2.5 Westernblot | 第25-27页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因检测系统 | 第27-28页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-32页 |
| 2.3.1 HBx与ADAM17在肝癌临床样本中高表达 | 第29-30页 |
| 2.3.2 HBx与ADAM17在肝癌临床样本中的表达具有相关性 | 第30-31页 |
| 2.3.3 HBx促进ADAM17蛋白在肝癌细胞中表达 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 HBx通过TGF-β信号通路激活ADAM | 第34-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第34页 |
| 3.1.2 质粒 | 第34页 |
| 3.1.3 主要试剂药品 | 第34-35页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-45页 |
| 3.2.1 细胞培养与冻存 | 第35页 |
| 3.2.2 质粒提取 | 第35页 |
| 3.2.3 双荧光素酶报告基因检测系统 | 第35页 |
| 3.2.4 质粒转染 | 第35页 |
| 3.2.5 PCR | 第35-38页 |
| 3.2.6 免疫共沉淀 | 第38-40页 |
| 3.2.7 慢病毒包装与稳定株筛选 | 第40-41页 |
| 3.2.8 AP-1沉默载体构建 | 第41-44页 |
| 3.2.9 Westernblot | 第44页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-49页 |
| 3.3.1 TGF-β1信号通路激活ADAM | 第45页 |
| 3.3.2 HBx通过TGF-β通路共激活ADAM | 第45-48页 |
| 3.3.3 AP-1通过抑制TGF-β抑制ADAM17的表达 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第4章 ADAM17促进肝癌细胞增殖及迁移 | 第50-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第50页 |
| 4.1.2 质粒 | 第50页 |
| 4.1.3 动物 | 第50页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.5 主要仪器 | 第50-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-55页 |
| 4.2.1 ADAM17沉默载体构建 | 第51页 |
| 4.2.2 质粒提取 | 第51页 |
| 4.2.3 慢病毒包装 | 第51-52页 |
| 4.2.4 稳定株构建 | 第52页 |
| 4.2.5 细胞活力检测 | 第52-53页 |
| 4.2.6 Transwell小室细胞迁移能力检测 | 第53页 |
| 4.2.7 动物实验 | 第53-54页 |
| 4.2.8 石蜡切片和苏木精一伊红(HE)染色法 | 第54-55页 |
| 4.2.9 统计学分析 | 第55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-62页 |
| 4.3.1 建立Huh7与SMMC-7721沉默ADAM17稳定细胞株 | 第55页 |
| 4.3.2 沉默Huh7细胞中ADAM17的表达抑制细胞增殖与迁移 | 第55-57页 |
| 4.3.3 沉默SMMC-7721细胞中ADAM17的表达抑制细胞增殖与迁移 | 第57-59页 |
| 4.3.4 ADAM17通过EMT途径影响肝癌细胞迁移 | 第59-60页 |
| 4.3.5 动物实验验证ADAM17在肝癌细胞迁移中的作用 | 第60-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 个人简历 | 第73页 |
