首页--医药、卫生论文--肿瘤学论文--造血器及淋巴系肿瘤论文--网状内皮系统肿瘤论文

AFAP1-AS1在生发中心型弥漫大B细胞淋巴瘤的作用和机制研究

摘要第4-8页
Abstract第8-12页
英文缩略语第13-17页
第一部分 生发中心型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系和正常CD19+B细胞中长链非编码RNA的芯片检测和生物信息学分析第17-34页
    1 前言第17-18页
    2 材料和方法第18-25页
        2.1 主要试剂和仪器第18-19页
            2.1.1 主要试剂及耗材第18-19页
            2.1.2 主要仪器第19页
        2.2 研究对象和分组第19页
        2.3 主要实验方法第19-24页
            2.3.1 细胞复苏第19-20页
            2.3.2 细胞换液、传代第20页
            2.3.3 细胞冻存第20页
            2.3.4 人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)分离第20-21页
            2.3.5 免疫磁珠分选CD19+B淋巴细胞(以1×107个细胞为例)第21页
            2.3.6 总RNA提取第21页
            2.3.7 RNA浓度及纯度的测定第21页
            2.3.8 RNA完整性的测定第21-22页
            2.3.9 芯片检测与数据分析第22页
            2.3.10 反转录反应第22-23页
            2.3.11 实时荧光定量PCR反应第23-24页
        2.4 生物信息学与统计学分析第24-25页
            2.4.1 差异表达lncRNA/mRNA的筛选第24页
            2.4.2 通路分析第24页
            2.4.3 LncRNA-mRNA共表达网络构建第24-25页
            2.4.4 qRT-PCR结果分析第25页
    3 结果第25-31页
        3.1 芯片RNA质量控制第25-26页
        3.2 LncRNA/mRNA表达谱第26-28页
            3.2.1 热图第26-27页
            3.2.2 散点图第27页
            3.2.3 火山图第27-28页
        3.3 通路分析第28页
        3.4 qRT-PCR验证芯片结果第28-29页
        3.5 LncRNA-mRNA共表达网络构建第29-31页
    4 讨论第31-32页
    5 结论第32-34页
第二部分 沉默GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞中AFAP1-AS1的表达对细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响第34-54页
    1 前言第34页
    2 材料和方法第34-43页
        2.1 主要试剂和仪器第34-37页
            2.1.1 主要试剂及耗材第34-36页
            2.1.2 主要仪器第36-37页
        2.2 研究对象和分组第37页
        2.3 主要实验方法第37-43页
            2.3.1 AFAP1-AS1shRNA腺病毒载体构建第37-38页
            2.3.2 AFAP1-AS1shRNA腺病毒的生产第38-39页
            2.3.3 下调AFAP1-AS1的GCB-DLBCL细胞系的建立第39-40页
            2.3.4 qRT-PCR检测腺病毒感染后细胞中AFAP1-AS1的表达第40页
            2.3.5 CCK-8增殖实验第40页
            2.3.6 流式细胞仪检测细胞周期第40-41页
            2.3.7 流式细胞仪检测细胞凋亡第41页
            2.3.8 Westernblot细胞周期、凋亡相关蛋白的检测第41-43页
    3 结果第43-52页
        3.1 AFAP1-AS1shRNA腺病毒载体的鉴定第43-46页
            3.1.1 siRNA序列和shRNA序列第43-44页
            3.1.2 表达载体的线性化第44页
            3.1.3 测序结果分析第44-46页
            3.1.4 腺病毒制备结果第46页
        3.2 腺病毒感染效率及流式分选GFP阳性细胞第46-47页
            3.2.1 荧光显微镜观察GFP荧光强度和荧光比例第46页
            3.2.2 qRT-PCR检测三种AFAP1-AS1shRNA的干扰效率第46-47页
            3.2.3 流式分选GFP阳性细胞第47页
        3.3 CCK-8法检测沉默AFAP1-AS1后对GCB-DLBCL细胞增殖的影响第47-48页
        3.4 流式细胞仪检测沉默AFAP1-AS1后对GCB-DLBCL细胞周期的影响第48-49页
        3.5 流式细胞仪检测沉默AFAP1-AS1后对GCB-DLBCL细胞凋亡的影响第49-50页
        3.6 Westernblot检测沉默AFAP1-AS1后GCB-DLBCL中CleavedCaspase-3、Bcl-2、Bax、CyclinD1、CyclinE1蛋白的表达水平第50-52页
    4 讨论第52-53页
    5 结论第53-54页
第三部分 AFAP1-AS1在GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞中作用机制研究第54-71页
    1 前言第54页
    2 材料和方法第54-60页
        2.1 主要试剂和仪器第54-56页
            2.1.1 主要试剂及耗材第54-55页
            2.1.2 主要仪器第55-56页
        2.2 研究对象和分组第56页
        2.3 主要实验方法第56-60页
            2.3.1 蛋白Trypsin酶解:第56页
            2.3.2 Label-free蛋白质谱分析:第56-57页
            2.3.3 KEGGPathway分析差异蛋白第57页
            2.3.4 Westernblot检测BTK、p-BTK蛋白的表达第57页
            2.3.5 双荧光素酶报告基因质粒构建第57-59页
            2.3.6 双荧光素报告基因检测第59-60页
    3 结果第60-68页
        3.1 质谱鉴定和定量结果评估第60-63页
            3.1.1 蛋白质相对分子质量分布第60-61页
            3.1.2 蛋白质等电点分布第61页
            3.1.3 肽段序列长度分布第61-62页
            3.1.4 肽段序列覆盖度第62-63页
        3.2 鉴定结果和差异蛋白统计第63-65页
            3.2.1 蛋白质鉴定结果第63页
            3.2.2 差异蛋白统计第63-65页
        3.3 KEGGPathway分析第65页
        3.4 Westernblot检测沉默AFAP1-AS1后GCB-DLBCL中BTK、p-BTK蛋白的表达水平第65-66页
        3.5 双荧光素酶报告基因实验第66-68页
            3.5.1 双荧光素酶报告基因实验检测AFAP1-AS1与miR-670-3p的结合情况第66-67页
            3.5.2 双荧光素酶报告基因实验检测BTK与miR-670-3p的结合情况第67-68页
    4 讨论第68-70页
    5 结论第70-71页
本研究创新性的自我评价第71-72页
参考文献第72-78页
综述第78-85页
    参考文献第82-85页
攻读学位期间取得的研究成果第85-86页
致谢第86-87页
个人简历第87页

论文共87页,点击 下载论文
上一篇:XIST、G3BP2和NFAT5调控胶质母细胞瘤血管新生的机制研究
下一篇:BST2表达与胃癌的关系及侵袭迁移的机制研究