| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略语 | 第10-15页 |
| 第一部分 ：BST2在胃癌组织中的表达及临床意义 | 第15-24页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-19页 |
| 2.1 主要材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 主要试剂及耗材 | 第16页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1 临床样本收集 | 第17页 |
| 2.2.2 实验步骤 | 第17-19页 |
| 2.3 结果判断分析 | 第19页 |
| 3 结果 | 第19-22页 |
| 3.1 胃癌和癌旁组织中BST2的表达情况 | 第19-20页 |
| 3.2 BST2在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系 | 第20-22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 5 结论 | 第23-24页 |
| 第二部分 ：沉默BST2对胃癌细胞生长和凋亡的影响 | 第24-54页 |
| 1 前言 | 第24-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-35页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第27页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第27页 |
| 2.2.3 细胞计数 | 第27页 |
| 2.2.4 细胞冻存 | 第27-28页 |
| 2.3 Real-timePCR检测SGC7901、MGC803、BGC823、HGC27胃癌细胞BST2mRNA的表达 | 第28-29页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第28页 |
| 2.3.2 反转录成cDNA | 第28页 |
| 2.3.3 实时荧光定量分析 | 第28-29页 |
| 2.4 Westernblot检测SGC7901、MGC803、BGC823、HGC27胃癌细胞BST2蛋白的表达 | 第29-31页 |
| 2.4.1 试剂的配制 | 第29页 |
| 2.4.2 提取细胞中的总蛋白 | 第29页 |
| 2.4.3 蛋白质定量(BCA法) | 第29-30页 |
| 2.4.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.4.5 转膜 | 第30页 |
| 2.4.6 封闭 | 第30页 |
| 2.4.7 孵育一抗 | 第30-31页 |
| 2.4.8 孵育二抗 | 第31页 |
| 2.4.9 ECL底物发光 | 第31页 |
| 2.4.10 抗体剥脱 | 第31页 |
| 2.4.11 封闭 | 第31页 |
| 2.4.12 孵育内参抗体 | 第31页 |
| 2.4.13 图像分析 | 第31页 |
| 2.5 瞬时转染BST2-siRNA干扰SGC7901、MGC803胃癌细胞BST2的表达 | 第31-32页 |
| 2.6 抑制BST2表达后各组胃癌细胞增殖和细胞周期的影响 | 第32-33页 |
| 2.6.1 四唑盐(MTT)比色法检测各组胃癌细胞的增殖情况 | 第32页 |
| 2.6.2 流式细胞仪检测各组胃癌细胞的细胞周期 | 第32-33页 |
| 2.6.3 Westernblot检测各组细胞中cyclinA、cyclinD1、Bax、Bcl-2、casepase3、cleaved-casepase3的表达情况 | 第33页 |
| 2.7 抑制BST2表达后各组胃癌细胞凋亡的影响 | 第33-34页 |
| 2.7.1 流式细胞仪检测各组胃癌细胞的凋亡情况(AnnexinV-FITC／PI复染法) | 第33页 |
| 2.7.2 Hoechst染色观察各组细胞的凋亡 | 第33页 |
| 2.7.3 抑制BST2表达对化疗药物诱导的各组胃癌细胞凋亡的影响 | 第33-34页 |
| 2.8 统计学分析 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-50页 |
| 3.1 筛选BST2高表达的胃癌细胞和干扰效果较好的BST2-siRNA并沉默胃癌细胞BST2的表达 | 第35-39页 |
| 3.1.1 SGC7901、MGC803、BGC823、HGC27胃癌细胞中BST2的表达差异 | 第35-36页 |
| 3.1.2 SGC7901和MGC803胃癌细胞分别转染四种BST2-siRNA后BST2mRNA表达 | 第36-38页 |
| 3.1.3 瞬时转染BST2-siRNA1、BST2-siRNA2后SGC7901和MGC803胃癌细胞BST | 第38-39页 |
| 3.2 抑制BST2表达对SGC7901和MGC803胃癌细胞增殖和周期的影响 | 第39-42页 |
| 3.2.1 MTT法检测各组细胞的增殖情况 | 第39-40页 |
| 3.2.2 流式细胞仪检测细胞周期分布 | 第40-41页 |
| 3.2.3 细胞周期蛋白cyclinA和cyclinD1的表达 | 第41-42页 |
| 3.3 抑制BST2表达对SGC7901和MGC803胃癌细胞凋亡的影响 | 第42-50页 |
| 3.3.1 流式细胞仪检测分析各组细胞的凋亡 | 第42-44页 |
| 3.3.2 Hoechst染色观察各组细胞的凋亡情况 | 第44页 |
| 3.3.3 细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase3、cleaved-caspase3的表达 | 第44-46页 |
| 3.3.4 抑制BST2表达后对化疗药物的敏感性的影响 | 第46-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 第三部分 ：BST2表达对胃癌细胞侵袭迁移的影响及机制 | 第54-86页 |
| 1 前言 | 第54-55页 |
| 2 材料和方法 | 第55-63页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第55-57页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第55-57页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-63页 |
| 2.2.1 抑制BST2表达后对SGC7901和MGC803胃癌细胞侵袭迁移的影响 | 第57-61页 |
| 2.2.2 BST2过表达对BGC823和HGC27胃癌细胞侵袭迁移能力的影响 | 第61-62页 |
| 2.2.3 统计学方法 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-82页 |
| 3.1 抑制BST2表达后各组细胞侵袭迁移行为的变化 | 第63-74页 |
| 3.1.1 Transwell法检测细胞的侵袭能力 | 第63-64页 |
| 3.1.2 细胞划痕实验检测细胞的迁移能力 | 第64-66页 |
| 3.1.3 明胶酶谱法和Westernblot检测各组细胞MMP2和MMP9蛋白变化 | 第66-68页 |
| 3.1.4 BST2沉默对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响 | 第68-71页 |
| 3.1.5 免疫细胞化学法检测BST2沉默后各组细胞中EMT转化相关蛋白Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin的表达 | 第71-74页 |
| 3.2 Akt信号通路抑制剂对BST2介导的胃癌细胞侵袭转移的影响 | 第74-82页 |
| 3.2.1 转染BST2过表达载体后BGC823和HGC27胃癌细胞BST2的表达 | 第74-75页 |
| 3.2.2 Transwell法检测BST2过表达后BGC823和HGC27各组细胞的侵袭能力.. | 第75-77页 |
| 3.2.3 划痕实验检测各组细胞的迁移能力 | 第77-79页 |
| 3.2.4 Westernblot检测BST2过表达后对Akt、p-Akt、IκBα、p-IκBα、p65、Snail、Slug转化的影响 | 第79-82页 |
| 4 讨论 | 第82-85页 |
| 5 结论 | 第85-86页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 综述 | 第96-111页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 个人简介 | 第113页 |
