| 中文摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 乳酸菌酸响应机制的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.2.1 胞内pH值的调控 | 第11-14页 |
| 1.2.2 大分子修复/保护 | 第14页 |
| 1.3 细胞壁研究进展 | 第14-21页 |
| 1.3.1 细胞壁组成成分研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.2 细胞壁生长调控研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4 本论文主要研究内容及意义 | 第21-23页 |
| 1.4.1 本论文主要研究内容 | 第21页 |
| 1.4.2 本论文主要研究意义 | 第21-23页 |
| 第2章 酸应激下及过表达肽聚糖合成基因对细胞壁厚度的影响 | 第23-29页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 供试菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验药品/试剂 | 第24页 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 | 第24页 |
| 2.2.4 培养基及试剂的配置 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.3.1 细菌样品制备 | 第25页 |
| 2.3.2 切片制备与电镜观察 | 第25-26页 |
| 2.4 结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.4.1 酸应激下细胞壁厚度变化 | 第26-27页 |
| 2.4.2 过表达菌株细胞壁厚度的变化 | 第27-28页 |
| 2.5 本章小结 | 第28-29页 |
| 第3章 sRNA263对细胞壁合成的调控及验证 | 第29-44页 |
| 3.1 引言 | 第29-30页 |
| 3.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 3.2.1 供试菌株和质粒 | 第30页 |
| 3.2.2 实验药品和试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.3 主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| 3.2.4 培养基及试剂的配置 | 第32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-38页 |
| 3.3.1 分子生物学基本操作 | 第32-35页 |
| 3.3.2 生物信息学分析预测 | 第35-36页 |
| 3.3.3 体内验证RNA-RNA相互作用 | 第36-38页 |
| 3.3.4 sRNA263介导的表观遗传学 | 第38页 |
| 3.4 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.4.1 生物信息学预测筛选sRNA靶标 | 第38页 |
| 3.4.2 融合载体的构建 | 第38页 |
| 3.4.3 报告系统的荧光检测 | 第38-39页 |
| 3.4.4 sRNA263与靶标基因二级结构的预测 | 第39-41页 |
| 3.4.5 sRNA与靶标基因互作的验证 | 第41-42页 |
| 3.4.6 sRNA263对细胞壁表型的影响 | 第42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第4章 肽桥酰胺化对细胞壁水解的调控 | 第44-66页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-46页 |
| 4.2.1 供试菌株和质粒 | 第44-45页 |
| 4.2.2 实验药品和试剂 | 第45-46页 |
| 4.2.3 主要仪器和设备 | 第46页 |
| 4.2.4 培养基及试剂的配置 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-52页 |
| 4.3.1 分子生物学基本操作 | 第46-48页 |
| 4.3.2 细胞壁肽聚糖提取与结构鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.3 胞内pH测定 | 第49-50页 |
| 4.3.4 酸耐受实验 | 第50页 |
| 4.3.5 乳酸乳球菌发酵及nisin效价测定 | 第50-51页 |
| 4.3.6 细菌表面特性测定 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与分析 | 第52-64页 |
| 4.4.1 酸应激下酰胺化基因的转录水平变化 | 第52-53页 |
| 4.4.2 过表达asnH基因提高菌株耐酸能力 | 第53-54页 |
| 4.4.3 酸耐受增强的菌株利于nisin产量提高 | 第54-55页 |
| 4.4.4 肽聚糖酰胺化的增加有助于细胞壁交联度的提升 | 第55-60页 |
| 4.4.5 肽聚糖酰胺化程度的增加不改变细胞表面特性 | 第60-61页 |
| 4.4.6 酰胺化程度的增加可导致细胞壁内部负电荷降低 | 第61-62页 |
| 4.4.7 酰胺化程度的增加可以通过维持细胞壁的完整性阻挡H~+ | 第62-63页 |
| 4.4.8 高表达水解酶导致菌株耐酸性和nisin产量的降低 | 第63-64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第5章 蛋白-蛋白(水解酶)相互作用对细胞壁水解的调控 | 第66-74页 |
| 5.1 引言 | 第66-67页 |
| 5.2 实验材料 | 第67-69页 |
| 5.2.1 供试菌株和质粒 | 第67页 |
| 5.2.2 实验药品和试剂 | 第67-68页 |
| 5.2.3 主要仪器和设备 | 第68页 |
| 5.2.4 培养基及试剂的配置 | 第68-69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 5.3.1 细菌双杂交方法筛选互作蛋白 | 第69-70页 |
| 5.3.2 双分子荧光互补(BiFc)法验证蛋白-蛋白相互作用 | 第70-72页 |
| 5.4 结果与分析 | 第72-73页 |
| 5.4.1 诱饵载体的自激活检测 | 第72页 |
| 5.4.2 互作蛋白的筛选与分析 | 第72页 |
| 5.4.3 BiFc法验证蛋白互作 | 第72-73页 |
| 5.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 第6章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 6.1 结论 | 第74-75页 |
| 6.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
