| 论文哲J新点 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-42页 |
| 1. 套式病毒目病毒研究综述 | 第14-27页 |
| 1.1 套式病毒目分类 | 第14-15页 |
| 1.2 套式病毒基因组及分子生物学 | 第15-26页 |
| 1.2.1 套式病毒基因组多样性 | 第15-17页 |
| 1.2.2 冠状病毒基因组 | 第17-18页 |
| 1.2.3 冠状病毒编码的蛋白 | 第18-24页 |
| 1.2.4 杆状套病毒GAV基因组 | 第24-25页 |
| 1.2.5 杆状套病毒GAV编码的蛋白 | 第25-26页 |
| 1.3 套式病毒的复制 | 第26-27页 |
| 2. RNA的加帽机制 | 第27-42页 |
| 2.1 真核mRNA的加帽 | 第27-31页 |
| 2.1.1 RNA的帽子结构 | 第27-28页 |
| 2.1.2 真核生物细胞核RNA的加帽 | 第28-30页 |
| 2.1.3 细胞质RNA的加帽 | 第30页 |
| 2.1.4 帽子结构的生物学功能 | 第30-31页 |
| 2.2 病毒RNA的加帽 | 第31-36页 |
| 2.2.1 病毒常规加帽方式 | 第32-34页 |
| 2.2.2 病毒的非常规加帽方式 | 第34-36页 |
| 2.3 病毒常规加帽过程中涉及到的酶 | 第36-38页 |
| 2.3.1 RNA三磷酸酶(RTPase) | 第36-37页 |
| 2.3.2 鸟苷酸转移酶(GTase) | 第37页 |
| 2.3.3 甲基转移酶(MTase)——N7甲基转移酶和2'-O-甲基转移酶 | 第37-38页 |
| 2.4 病毒RNA帽子结构逃逸先天免疫识别 | 第38-42页 |
| 第二章 研究内容 | 第42-60页 |
| 1. 实验材料 | 第42-44页 |
| 1.1 实验仪器 | 第42-43页 |
| 1.2 实验耗材、试剂 | 第43-44页 |
| 2. 实验方法 | 第44-60页 |
| 2.1 分子生物学实验 | 第44-56页 |
| 2.1.1 质粒的构建 | 第44-52页 |
| 2.1.2 感受态的制备 | 第52-53页 |
| 2.1.3 RNA底物的制备 | 第53-56页 |
| 2.2 蛋白质表达纯化 | 第56-57页 |
| 2.2.1 蛋白质的表达 | 第56页 |
| 2.2.2 蛋白质的纯化 | 第56-57页 |
| 2.3 生化活性检测 | 第57-60页 |
| 2.3.1 ~3H标记甲基掺入试验 | 第57-58页 |
| 2.3.2 薄层层析实验检测活性 | 第58-60页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第60-78页 |
| 1. 研究背景与立项依据 | 第60页 |
| 2. 实验结果 | 第60-78页 |
| 2.1 杆状套病毒非结构蛋白nsp16独自行使2'-O-甲基转移酶活性 | 第60-65页 |
| 2.1.1 预测相关病毒2'-O-甲基转移酶 | 第60-62页 |
| 2.1.2 相关基因的克隆及蛋白的表达纯化 | 第62-63页 |
| 2.1.3 甲基转移酶活性初步探索 | 第63-65页 |
| 2.2 GAV nsp16作为2'-O-甲基转移酶具有底物特异性 | 第65-69页 |
| 2.2.1 GAV nsp16特异性甲基化含有0型帽子结构的RNA | 第65-66页 |
| 2.2.2 GAV nsp16特异性甲基化以A起始的RNA | 第66-68页 |
| 2.2.3 GAV nsp16对底物RNA的长度有要求 | 第68-69页 |
| 2.3 GAV nsp16发挥活性的合适生化条件探究 | 第69-71页 |
| 2.3.1 GAV nsp16最适反应条件——温度 | 第69-70页 |
| 2.3.2 GAV nsp16最适反应条件——pH | 第70页 |
| 2.3.3 GAV nsp16最适反应条件——金属离子 | 第70-71页 |
| 2.4 GAV nsp16的保守催化四分体K-D-K-E是其甲基转移酶活性所必需的 | 第71-76页 |
| 2.4.1 GAV nsp16催化四分体K-D-K-E及其结构预测 | 第71-74页 |
| 2.4.2 GAV nsp16 K-D-K-E催化四分体是其活性所必需的 | 第74-76页 |
| 2.5 广谱甲基转移酶抑制剂对GAV nsp16的2'-O-甲基转移酶活性抑制效果 | 第76-78页 |
| 第四章 小结与讨论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-99页 |
| 研究生期间发表论文 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
