| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略语列表(Abbreviation) | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-24页 |
| 1.1 口蹄疫简介 | 第15-19页 |
| 1.1.1 简述口蹄疫的危害及其现状 | 第15页 |
| 1.1.2 口蹄疫病毒的分子生物学 | 第15-16页 |
| 1.1.3 口蹄疫现状及新型口蹄疫疫苗 | 第16-19页 |
| 1.1.3.1 传统疫苗 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 新型FMD疫苗 | 第18-19页 |
| 1.2 干扰素简介 | 第19-22页 |
| 1.2.1 干扰素的发展和作用 | 第19-20页 |
| 1.2.2 干扰素的分型 | 第20页 |
| 1.2.3 IFN的诱导表达 | 第20页 |
| 1.2.4 IFN的作用机理 | 第20-21页 |
| 1.2.5 干扰素刺激基因(ISGs) | 第21-22页 |
| 1.2.6 干扰素诱导跨膜蛋白(IFITM) | 第22页 |
| 1.3 杆状病毒表达系统 | 第22-24页 |
| 1.3.1 简述杆状病毒 | 第22页 |
| 1.3.2 杆状病毒作为载体的进展 | 第22页 |
| 1.3.3 杆状病毒作为载体的优势 | 第22-24页 |
| 2 目的和意义 | 第24-25页 |
| 3 材料和方法 | 第25-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 3.1.1 菌种、细胞及毒株 | 第25页 |
| 3.1.2 质粒载体 | 第25页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要培养基的配制 | 第26-27页 |
| 3.1.5 主要缓冲液 | 第27页 |
| 3.1.5.1 质粒提取缓冲液 | 第27页 |
| 3.1.5.2 Western blot缓冲液 | 第27页 |
| 3.1.6 其他溶液 | 第27-28页 |
| 3.1.7 本实验所用各种PCR引物 | 第28-29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-39页 |
| 3.2.1 PCR获得目的基因 | 第29-30页 |
| 3.2.2 限制性内切酶酶切反应 | 第30页 |
| 3.2.3 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第30页 |
| 3.2.4 PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.5 外源DNA片段与载体的连接反应 | 第31页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| 3.2.7 连接产物的转化 | 第31-32页 |
| 3.2.8 重组质粒的小量制备(OMEGA质粒小提试剂盒) | 第32页 |
| 3.2.9 质粒DNA的定量 | 第32页 |
| 3.2.10 重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| 3.2.11 蓝白斑筛选 | 第32页 |
| 3.2.12 重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.13 脂质体介导的转染 | 第33页 |
| 3.2.14 重组假型杆状病毒转导哺乳动物细胞 | 第33页 |
| 3.2.15 构建重组假型杆状病毒的操作流程及示意图 | 第33-34页 |
| 3.2.16 Western blot检测目的蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 3.2.16.1 样品的处理 | 第34页 |
| 3.2.16.2 SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| 3.2.16.3 Western blot检测 | 第34-35页 |
| 3.2.17 空斑减少试验检测 | 第35页 |
| 3.2.18 荧光定量PCR | 第35-37页 |
| 3.2.18.1 样品的制备 | 第35页 |
| 3.2.18.2 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2.18.3 cDNA的合成 | 第36页 |
| 3.2.18.4 实时荧光定量PCR检测 | 第36-37页 |
| 3.2.18.4.1 实时荧光定量PCR试验 | 第36页 |
| 3.2.18.4.2 实时荧光PCR相对定量mRNA表达水平的计算 | 第36-37页 |
| 3.2.19 动物试验 | 第37-38页 |
| 3.2.19.1 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ-2P1的动物试验方案 | 第37页 |
| 3.2.19.2 动物试验血清的中和抗体检测 | 第37页 |
| 3.2.19.3 动物试验血清的ELISA抗体检测 | 第37-38页 |
| 3.2.19.4 动物试验血清的ELISA抗体检测(韩国金诺ELISA试剂盒) | 第38页 |
| 3.2.19.5 外周血单个核细胞(PBMCs)细胞的分离 | 第38页 |
| 3.2.20 统计学方法 | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-56页 |
| 4.1 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-α/IFN-γ/sIFITM3的构建及抗病毒活性的研究 | 第39-49页 |
| 4.1.1 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-α/IFN-γ/sIFITM3的构建 | 第39-49页 |
| 4.1.1.1 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-α的构建 | 第39-41页 |
| 4.1.1.1.1 重组转移载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.1.1.1.2 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-α的获得 | 第40页 |
| 4.1.1.1.3 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-α的Western blot检测 | 第40-41页 |
| 4.1.1.2 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ的获得 | 第41-42页 |
| 4.1.1.2.1 重组转移载体的构建 | 第41页 |
| 4.1.1.2.2 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ的获得 | 第41-42页 |
| 4.1.1.3 重组杆状病毒Ac-VSVG-sIFITM3的获得 | 第42-44页 |
| 4.1.1.3.1 转移载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.1.1.3.2 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-sIFITM3的获得 | 第43页 |
| 4.1.1.3.3 重组杆状病毒Ac-VSVG-sIFITM3的Western blot检测 | 第43-44页 |
| 4.1.1.4 Ac-VSVG-IFN-α/IFN-γ/sIFITM3的抗病毒效果检测 | 第44-49页 |
| 4.1.1.4.1 Ac-VSVG-IFN-α在细胞上的抗病毒效果 | 第44-45页 |
| 4.1.1.4.2 Ac-VSVG-IFN-γ在细胞上的抗病毒效果 | 第45-46页 |
| 4.1.1.4.3 Ac-VSVG-IFN-α/IFN-γ转导细胞后ISGs的转录 | 第46-47页 |
| 4.1.1.4.4 Ac-VSVG-sIFITM3在细胞上的抗病毒效果 | 第47-48页 |
| 4.1.1.4.5 重组杆状病毒Ac-VSVG-IFN-α/IFN-γ/sIFITM3的协同抗病毒效应的初步探索 | 第48-49页 |
| 4.1.1.4.5.1 Ac-VSVG-IFN-α和Ac-VSVG-IFN-γ的协同抗病毒效应 | 第48页 |
| 4.1.1.4.5.2 Ac-VSVG-IFN-γ和Ac-VSVG-sIFITM3的协同抗病毒效应 | 第48-49页 |
| 4.1.1.4.5.3 Ac-VSVG-IFN-γ/sIFITM3的协同抗病毒效应 | 第49页 |
| 4.2 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ-2P1的构建及免疫效力试验 | 第49-56页 |
| 4.2.1 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ-2P1的获得 | 第49-51页 |
| 4.2.1.1 FMDV P1基因的获得和转移载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.1.2 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ-2P1的获得 | 第50-51页 |
| 4.2.2 Ac-VSVG-IFN-γ-2P1在细胞上的抗病毒效果 | 第51-52页 |
| 4.2.3 重组假型杆状病毒Ac-VSVG-IFN-γ-2P1的动物试验 | 第52-56页 |
| 4.2.3.1 动物试验血清ELISA水平的检测 | 第52-53页 |
| 4.2.3.2 中和抗体水平的检测 | 第53-54页 |
| 4.2.3.3 PBMCs中ISGs的检测 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-59页 |
| 6 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
