| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 结核分枝杆菌转录调控的研究现状 | 第9-10页 |
| 1.2 耻垢分枝杆菌的模式生物学地位 | 第10-11页 |
| 1.3 TetR家族转录因子 | 第11-15页 |
| 1.3.1 转录因子的分类 | 第11-13页 |
| 1.3.2 TetR家族转录因子 | 第13页 |
| 1.3.3 TetR家族转录因子的构象及结合DNA的性质 | 第13-15页 |
| 1.4 耻垢分枝杆菌转录因子Ms6564研究现状 | 第15-17页 |
| 1.4.1 Ms6564是一个广泛调控的TetR家族转录因子 | 第15-16页 |
| 1.4.2 Ms6564调控大量与细胞周期和DNA损伤修复相关的基因 | 第16页 |
| 1.4.3 Ms6564负调控细菌的突变频率和突变率 | 第16-17页 |
| 1.5 本课题研究的目的与意义 | 第17页 |
| 1.6 本课题的主要研究内容 | 第17-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-33页 |
| 2.1 材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 抗生素 | 第19-20页 |
| 2.1.3 酶、试剂和试剂盒 | 第20页 |
| 2.1.4 质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.5 引物及寡核甘酸序列 | 第21页 |
| 2.1.6 培养基、试剂、缓冲液的配置 | 第21-24页 |
| 2.1.6.1 LB培养基(1000 m1)的配置 | 第21页 |
| 2.1.6.27 H9培养基(1000 m1)的配置 | 第21页 |
| 2.1.6.3 琼脂糖凝胶相关试剂的配置 | 第21-22页 |
| 2.1.6.4 蛋白纯化、透析及SDS-PAGE相关试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.1.6.5 EMSA试剂的配置 | 第23页 |
| 2.1.6.6 ChIP相关试剂的配置 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 定点突变 | 第24-25页 |
| 2.2.2 突变体及截短基因片段的克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.3 含6×His标签的蛋白质的诱导表达及纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.4 蛋白质的透析 | 第28页 |
| 2.2.5 凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA) | 第28-29页 |
| 2.2.6 染色质免疫共沉淀实验(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第29-30页 |
| 2.2.7 RNA的抽提 | 第30-31页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR) | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-47页 |
| 3.1 Ms6564结合DNA的关键氨基酸残基是第47位Lys | 第33-41页 |
| 3.1.1 耻垢分枝杆菌Ms6564相关突变体和截短基因片段的克隆 | 第33-37页 |
| 3.1.2 耻垢分枝杆菌Ms6564相关突变体蛋白和截短蛋白的表达纯化 | 第37-39页 |
| 3.1.3 EMSA实验证实Ms6564结合DNA的关键氨基酸残基是第47位Lys | 第39-41页 |
| 3.2 Ms6564结合DNA的Motif是GXCXXTXCGXCXXGXC | 第41-43页 |
| 3.2.1 DNA突变体的设计 | 第41-42页 |
| 3.2.2 EMSA实验表明Ms6564可能结合一个Motif:GXCXXTXCGXCXXGXC | 第42-43页 |
| 3.3 Ms6564能够结合34个靶启动子且调控靶基因的表达 | 第43-47页 |
| 3.3.1 ChIP实验证明Ms6564能够结合34个靶启动子 | 第43-44页 |
| 3.3.2 qRT-PCR实验证明Ms6564能够调控30个靶基因的表达 | 第44-47页 |
| 4 总结与讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 总结 | 第47页 |
| 4.2 讨论 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-65页 |
