| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-37页 |
| ·小反刍兽疫疫苗的研究进展 | 第14-20页 |
| ·小反刍兽疫病毒 | 第14-15页 |
| ·流行毒株的驯化 | 第15-16页 |
| ·小反刍兽疫疫苗 | 第16-20页 |
| ·展望 | 第20页 |
| ·小反刍兽疫流行病学的研究进展 | 第20-26页 |
| ·易感动物和传播途径 | 第20-22页 |
| ·历史分布 | 第22页 |
| ·当前分布 | 第22-26页 |
| ·PPRV 的诊断 | 第26页 |
| ·反向遗产操作技术在麻疹病毒属病毒研究中的应用 | 第26-37页 |
| ·反向遗传操作系统建立的策略 | 第27-29页 |
| ·反向遗传操作系统的应用 | 第29-32页 |
| ·反向遗传操作系统在麻疹病毒属中的应用 | 第32-36页 |
| ·病毒反向遗传学操作技术的不足与发展前景 | 第36-37页 |
| 第二章 PPRV 生物学特性研究及其阳性血清的制备 | 第37-43页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·毒株、细胞和实验动物 | 第37页 |
| ·试剂耗材 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·细胞复苏和传代 | 第38页 |
| ·病毒增殖 | 第38页 |
| ·CPE 观察 | 第38页 |
| ·TCID50测定 | 第38-39页 |
| ·阳性血清制备 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·CPE 观察 | 第39页 |
| ·TCID50测定 | 第39页 |
| ·阳性血清制备 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 PPRV 全基因组以及结构蛋白生物信息学分析 | 第43-66页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·全基因组进化关系分析 | 第44-45页 |
| ·结构基因进化关系分析 | 第45-46页 |
| ·结构蛋白二级结构预测 | 第46-48页 |
| ·结构蛋白三级结构预测 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-64页 |
| ·全基因组进化关系分析 | 第48页 |
| ·结构基因进化关系分析 | 第48页 |
| ·结构蛋白的二级结构预测 | 第48-50页 |
| ·结构蛋白三级结构预测 | 第50-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 PPRV P 蛋白基因的克隆、表达及抗体的制备 | 第66-73页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-69页 |
| ·P 蛋白基因的 RT-PCR 扩增 | 第67页 |
| ·P 蛋白基因的克隆 | 第67页 |
| ·P 蛋白原核表达载体的构建 | 第67页 |
| ·P 蛋白的原核表达 | 第67页 |
| ·P 蛋白表达条件的优化 | 第67-68页 |
| ·可溶性 P 蛋白的纯化 | 第68页 |
| ·P 蛋白含量的测定 | 第68页 |
| ·抗体的制备 | 第68页 |
| ·抗体效价的测定 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-70页 |
| ·PPRV P 蛋白基因的克隆 | 第69页 |
| ·P 蛋白原核表达载体的构建 | 第69页 |
| ·P 蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第69-70页 |
| ·P 蛋白诱导表达条件的优化 | 第70页 |
| ·可溶性 P 蛋白的纯化 | 第70页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第70页 |
| ·多克隆抗体的鉴定与效价的测定 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第五章 PPRV P 蛋白真核表达载体的构建及其表达 | 第73-78页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·方法 | 第74-75页 |
| ·P 蛋白基因的扩增 | 第74页 |
| ·pcDNA3.1/P 质粒的构建和序列测定 | 第74页 |
| ·pcDNA3.1/P 转染 Vero 细胞 | 第74页 |
| ·P 蛋白表达在 mRNA 水平的检测 | 第74页 |
| ·间接荧光检测 P 蛋白表达 | 第74-75页 |
| ·WB 检测 P 蛋白表达 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-77页 |
| ·pcDNA3.1/P 质粒的构建 | 第75页 |
| ·P 蛋白在 Vero 细胞中的表达 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| 第六章 PPRV N 蛋白真核表达载体的构建及其表达 | 第78-84页 |
| ·材料 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-80页 |
| ·N 蛋白基因的扩增 | 第79页 |
| ·pcDNA3.1/N 质粒的构建和序列测定 | 第79页 |
| ·pcDNA3.1/N 转染 Vero 细胞 | 第79页 |
| ·N 蛋白表达在 mRNA 水平的检测 | 第79-80页 |
| ·间接荧光检测 N 蛋白表达 | 第80页 |
| ·WB 检测 N 蛋白表达 | 第80页 |
| ·结果 | 第80-82页 |
| ·pcDNA3.1/N 质粒的构建 | 第80页 |
| ·N 蛋白在 Vero 细胞中的表达 | 第80-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第七章 PPRV L 蛋白的表达及其多克隆抗体制备 | 第84-90页 |
| ·材料 | 第84页 |
| ·方法 | 第84-86页 |
| ·L 蛋白基因的分段扩增 | 第84-85页 |
| ·L 蛋白分段表达载体的构建 | 第85页 |
| ·蛋白的表达 | 第85页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第85页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第85页 |
| ·抗体的制备 | 第85页 |
| ·抗体效价的测定 | 第85-86页 |
| ·结果 | 第86-89页 |
| ·表达载体的构建 | 第86页 |
| ·蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第86页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第86页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第86页 |
| ·多克隆抗体的鉴定与效价的测定 | 第86-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| 第八章 PPRV L 蛋白真核表达载体的构建及其表达 | 第90-96页 |
| ·材料 | 第90-91页 |
| ·方法 | 第91-92页 |
| ·l 基因的扩增 | 第91页 |
| ·pcDNA3.1/L 质粒的构建和序列测定 | 第91页 |
| ·pcDNA3.1/L 转染 Vero 细胞 | 第91页 |
| ·L 蛋白表达在 mRNA 水平的检测 | 第91页 |
| ·间接荧光检测 L 蛋白表达 | 第91页 |
| ·WB 检测 L 蛋白表达 | 第91-92页 |
| ·结果 | 第92-94页 |
| ·pcDNA3.1/L 质粒的构建 | 第92页 |
| ·L 蛋白在 Vero 细胞中的表达 | 第92-94页 |
| ·讨论 | 第94-96页 |
| 第九章 PPRV 基因组全长 cDNA 的构建及其序列的测定 | 第96-103页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·方法 | 第97-99页 |
| ·引物 | 第97页 |
| ·PPRV 培养及 RNA 的提取 | 第97页 |
| ·RT-PCR | 第97页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第97-98页 |
| ·全长 cDNA 的连接 | 第98页 |
| ·PPRV Nigeria 75/1 株序列比较和系统发生树分析序列分析 | 第98-99页 |
| ·结果 | 第99-101页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第99页 |
| ·各片段的克隆结果 | 第99页 |
| ·全长 cDNA 构建结果 | 第99页 |
| ·全长 cDNA 的序列测定及其核苷酸序列分析 | 第99-100页 |
| ·Nigeria 75/1 株系统发生树分析结果 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| 第十章 PPRV 全长 DNA 疫苗的免疫学研究 | 第103-113页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-105页 |
| ·疫苗的制备及其免疫接种 | 第104页 |
| ·抗体测定 | 第104页 |
| ·细胞因子测定 | 第104页 |
| ·T 细胞的增殖 | 第104页 |
| ·流式细胞技术 | 第104-105页 |
| ·中和抗体测定 | 第105页 |
| ·数据的统计分析 | 第105页 |
| ·结果 | 第105-111页 |
| ·抗体测定 | 第105页 |
| ·细胞因子测定 | 第105-107页 |
| ·T 细胞的增殖 | 第107-108页 |
| ·流式细胞技术 | 第108页 |
| ·中和抗体测定 | 第108-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| 第十一章 全文结论 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-136页 |
| 附录 | 第136-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 作者简历 | 第146-147页 |
