| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 0. 前言 | 第13-21页 |
| 0.1 琼胶及琼胶酶 | 第13-16页 |
| 0.1.1 琼胶 | 第13页 |
| 0.1.2 琼胶酶 | 第13-16页 |
| 0.2 琼胶寡糖 | 第16-18页 |
| 0.2.1 琼胶寡糖生理活性 | 第16-17页 |
| 0.2.2 琼胶寡糖的制备 | 第17-18页 |
| 0.3 琼胶酶的应用 | 第18-19页 |
| 0.3.1 回收琼脂糖中的DNA | 第18-19页 |
| 0.3.2 制备琼胶寡糖 | 第19页 |
| 0.3.3 海藻生物物质的研究 | 第19页 |
| 0.4 本课题目的意义和主要研究内容 | 第19-21页 |
| 0.4.1 本课题的目的意义 | 第19-20页 |
| 0.4.2 本课题的主要研究内容 | 第20-21页 |
| 1. 产琼胶酶菌株的筛选及发酵条件优化 | 第21-33页 |
| 1.1 引言 | 第21页 |
| 1.2 实验材料与仪器 | 第21-22页 |
| 1.2.1 原材料 | 第21-22页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.2.3 培养基 | 第22页 |
| 1.3 实验方法 | 第22-26页 |
| 1.3.1 海水样品中筛选琼胶降解菌 | 第22页 |
| 1.3.2 从海藻中筛选琼胶降解菌 | 第22-23页 |
| 1.3.3 菌种保藏 | 第23页 |
| 1.3.4 16S rRNA物种鉴定 | 第23页 |
| 1.3.5 系统进化树的建立 | 第23页 |
| 1.3.6 琼胶酶酶学性质检测 | 第23-24页 |
| 1.3.7 D-半乳糖标准曲线的绘制 | 第24-25页 |
| 1.3.8 酶活检测条件优化 | 第25页 |
| 1.3.9 发酵条件的优化 | 第25-26页 |
| 1.4 结果与讨论 | 第26-32页 |
| 1.4.1 产琼胶酶菌株的筛选 | 第26-27页 |
| 1.4.2 16S rRNA菌株鉴定 | 第27-28页 |
| 1.4.3 发酵条件的优化 | 第28-32页 |
| 1.5 本章小结 | 第32-33页 |
| 2. 两个Agarivorans albus OAY2来源的β-琼胶酶的纯化和酶学性质研究 | 第33-50页 |
| 2.1 引言 | 第33-34页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要溶液的配置 | 第35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-40页 |
| 2.3.1 琼胶酶分离纯化流程 | 第35-36页 |
| 2.3.2 Agarivorans albus OAY2菌株的发酵培养 | 第36页 |
| 2.3.3 蛋白质标准曲线的绘制 | 第36-37页 |
| 2.3.4 硫酸铵分级沉淀 | 第37页 |
| 2.3.5 DEAE弱阴离子交换 | 第37-38页 |
| 2.3.6 强阴离子交换Q层析 | 第38页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.3.8 琼胶酶酶学性质检测 | 第38-40页 |
| 2.3.9 基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪MALDI-TOF-TOF/MS | 第40页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第40-49页 |
| 2.4.1 硫酸铵分级沉淀 | 第40-41页 |
| 2.4.2 琼胶酶的纯化 | 第41-42页 |
| 2.4.3 温度及pH对琼胶的影响 | 第42-45页 |
| 2.4.4 水解产物的分析 | 第45-47页 |
| 2.4.5 基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪MALDI-TOF-TOF/MS | 第47-49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 3. 新琼二糖水解酶AgWH117A结晶及结构分析 | 第50-60页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第50-52页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第50-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 PET-21a-AgWH117A的诱导表达 | 第52页 |
| 3.3.2 AgWH117A的纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.3 蛋白质浓度的测定 | 第53页 |
| 3.3.4 AgWH117A结晶条件的筛选 | 第53页 |
| 3.3.5 X-射线衍射蛋白晶体及数据收集 | 第53-54页 |
| 3.3.6 衍射数据处理及结构解析 | 第54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-59页 |
| 3.4.1 AgWH117A的纯化结果 | 第54-55页 |
| 3.4.2. 晶体筛选 | 第55-56页 |
| 3.4.3. 晶体解析 | 第56页 |
| 3.4.4 AgWH117A的整体结构 | 第56-59页 |
| 3.5. 本章小结 | 第59-60页 |
| 4. 利用TK-SA模型探索影响AgWH117A热稳定性的氨基酸 | 第60-72页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第60-62页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第60-61页 |
| 4.2.2 实验主要仪器 | 第61-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-67页 |
| 4.3.1 利用TK-SA模型计算氨基酸的能量 | 第62页 |
| 4.3.2 可突变氨基酸位点的选择 | 第62-64页 |
| 4.3.3 引物设计 | 第64页 |
| 4.3.4 氨基酸突变体的获得 | 第64-66页 |
| 4.3.5 测定突变体的酶活 | 第66-67页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第67-71页 |
| 4.4.1 PCR获得突变DNA | 第67-68页 |
| 4.4.2 突变体的纯化 | 第68-69页 |
| 4.4.3 新琼二糖水解酶AgWH117A及突变体热稳定性的测定 | 第69-71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 5. 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 个人简历 | 第84页 |
| 发表的学术论文 | 第84页 |
