| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-42页 |
| 1.1. 丝状病毒研究概述 | 第20-25页 |
| 1.1.1. 丝状病毒流行病学 | 第20-22页 |
| 1.1.2. 丝状病毒感染的临床症状 | 第22页 |
| 1.1.3. 丝状病毒的种属分类 | 第22-23页 |
| 1.1.4. 丝状病毒的形态、基因组结构与病毒蛋白 | 第23-25页 |
| 1.2. 丝状病毒基质蛋白VP40与病毒出芽 | 第25-30页 |
| 1.2.1. VP40蛋白的构象与功能 | 第25-27页 |
| 1.2.2. VP40介导病毒出芽的工作模式 | 第27-28页 |
| 1.2.3. VP40蛋白的功能区域 | 第28-29页 |
| 1.2.4. Late budding domain | 第29页 |
| 1.2.5. 与VP40相互作用的促出芽宿主蛋白 | 第29-30页 |
| 1.3. ESCRT机制与病毒出芽 | 第30-33页 |
| 1.3.1. ESCRT机制概述 | 第31-32页 |
| 1.3.2. ESCRT与病毒出芽 | 第32-33页 |
| 1.4. 影响病毒出芽的其他病毒结构蛋白 | 第33页 |
| 1.5. 影响病毒出芽的其他宿主因素 | 第33-34页 |
| 1.5.1. 细胞骨架成分—肌动蛋白 | 第33-34页 |
| 1.5.2. 细胞质膜的磷脂丝氨酸水平 | 第34页 |
| 1.5.3. 钙离子通道 | 第34页 |
| 1.6. PPxY基序-WW domain相互作用 | 第34-36页 |
| 1.6.1. WW domain概述 | 第34-36页 |
| 1.6.2. PPxY—WW domain相互作用与病毒出芽 | 第36页 |
| 1.7. 丝状病毒出芽的抑制因素 | 第36-38页 |
| 1.7.1. 抑制丝状病毒出芽的宿主蛋白 | 第36-37页 |
| 1.7.2. 阻断丝状病毒出芽的小分子抑制剂 | 第37-38页 |
| 1.8. BAG3蛋白研究概述 | 第38-39页 |
| 1.8.1. BAG3蛋白的结构与功能 | 第38页 |
| 1.8.2. BAG3蛋白与病毒生命周期的联系 | 第38-39页 |
| 1.9. 细胞自噬与病毒生命周期 | 第39-40页 |
| 1.10. 研究目的与意义 | 第40-42页 |
| 第二章 BAG3与EBOV和MARV VP40相互作用及对VP40介导的病毒出芽的影响 | 第42-78页 |
| 2.1. 材料 | 第43-44页 |
| 2.1.1. 细胞 | 第43页 |
| 2.1.2. 病毒 | 第43页 |
| 2.1.3. 质粒 | 第43页 |
| 2.1.4. 抗体 | 第43-44页 |
| 2.1.5. 主要试剂 | 第44页 |
| 2.2. 方法 | 第44-53页 |
| 2.2.1. 脯氨酸富集(Proline rich)基序PPxY阅读阵列的构建与“扫描” | 第44-45页 |
| 2.2.2. 质粒的细菌转化 | 第45页 |
| 2.2.3. 蛋白的原核表达 | 第45页 |
| 2.2.4. 菌体蛋白的提取 | 第45页 |
| 2.2.5. 真核表达质粒的细胞转染 | 第45-46页 |
| 2.2.6. SDS-PAGE与Western blot | 第46-48页 |
| 2.2.7. GST-pulldown | 第48页 |
| 2.2.8. 免疫共沉淀 | 第48-50页 |
| 2.2.9. 病毒样颗粒VLP的收获与检测 | 第50-51页 |
| 2.2.10. siRNA的转染 | 第51页 |
| 2.2.11. 压制细胞内BAG3表达对VLP出芽的影响 | 第51页 |
| 2.2.12. VSV-M40重组病毒的感染 | 第51-52页 |
| 2.2.13. 病毒滴度的测定 | 第52-53页 |
| 2.3. 结果 | 第53-74页 |
| 2.3.1. “脯氨酸富集”PPxY基序阅读阵列的构建 | 第53页 |
| 2.3.2. BAG3 WW domain结合eVP40 PPxY基序 | 第53-54页 |
| 2.3.3. BAG3 WW domain在体外通过PPxY基序结合eVP40与mVP40 | 第54-57页 |
| 2.3.4. BAG3在细胞内结合eVP40和mVP40 | 第57-60页 |
| 2.3.5. WW domain是BAG3—VP40蛋白相互作用的必要条件 | 第60-63页 |
| 2.3.6. BAG3—VP40相互作用抑制VP40介导的病毒样颗粒出芽 | 第63-67页 |
| 2.3.7. BAG3通过剂量依赖的方式抑制VP40介导的VLP出芽 | 第67-70页 |
| 2.3.8. 压制细胞内源性BAG3的表达促进VP40 VLP的出芽释放 | 第70-72页 |
| 2.3.9. BAG3抑制感染性重组病毒VSV-M40的释放 | 第72-74页 |
| 2.4 讨论 | 第74-77页 |
| 2.5 小结 | 第77-78页 |
| 第三章 BAG3调控VP40介导出芽过程的机制探索 | 第78-102页 |
| 3.1. 材料 | 第79-80页 |
| 3.1.1. 细胞 | 第79页 |
| 3.1.2. 病毒 | 第79页 |
| 3.1.3. 质粒 | 第79页 |
| 3.1.4. 抗体 | 第79-80页 |
| 3.1.5. 主要试剂 | 第80页 |
| 3.2. 方法 | 第80-84页 |
| 3.2.1. 活细胞成像 | 第80-81页 |
| 3.2.2. 细胞质与细胞膜蛋白组分的分离提取 | 第81页 |
| 3.2.3. 双染色间接免疫荧光实验 | 第81-82页 |
| 3.2.4. BAG3竞争性抑制VP40-Nedd4/ITCH结合实验 | 第82页 |
| 3.2.5. VSV-eGP重组病毒的感染 | 第82-84页 |
| 3.3. 结果 | 第84-98页 |
| 3.3.1. BAG3改变eVP40的细胞内分布定位 | 第84-87页 |
| 3.3.2. BAG3减少细胞膜上eVP40和mVP40蛋白的含量 | 第87-90页 |
| 3.3.3. BAG3阻碍eVP40蛋白向细胞膜聚集 | 第90-92页 |
| 3.3.4. BAG3导致eVP40蛋白被扣押入细胞内的聚集体中 | 第92-95页 |
| 3.3.5. BAG3竞争性阻碍eVP40与其他促出芽“WW”宿主蛋白的结合 | 第95-97页 |
| 3.3.6. 重组病毒VSV-eGP诱导细胞内BAG3表达上调 | 第97-98页 |
| 3.4 讨论 | 第98-101页 |
| 3.5 小结 | 第101-102页 |
| 第四章 结论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-120页 |
| 附表 | 第120-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第124页 |
