| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第13-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 钙结合蛋白 | 第14-16页 |
| ·EF-hand 结构概述 | 第14-15页 |
| ·EF-hand 结构蛋白的功能与分类 | 第15-16页 |
| 2 钙整合素结合蛋白CIB | 第16-20页 |
| ·CIB 的发现与命名 | 第16页 |
| ·CIB 的结构概述 | 第16-17页 |
| ·CIB 结构的研究进展 | 第17-18页 |
| ·关于CIB 生物学功能的研究 | 第18-20页 |
| 3 研究现状与展望 | 第20-21页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第21-23页 |
| 1 实验目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21页 |
| 3 实验流程图 | 第21-23页 |
| 第二部分 研究论文 | 第23-73页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第24-33页 |
| 1 生物信息学工具 | 第24页 |
| 2 分析方法 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-31页 |
| ·BmCIB 基因的序列 | 第25-26页 |
| ·二级结构预测 | 第26页 |
| ·BmCIB 氨基酸序列同源性比对 | 第26-27页 |
| ·CIB 进化树的构建 | 第27-28页 |
| ·疏水性分析 | 第28-29页 |
| ·跨膜区预测 | 第29页 |
| ·信号肽预测 | 第29-30页 |
| ·定位预测 | 第30页 |
| ·高级结构预测 | 第30页 |
| ·功能位点预测 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 BmCIB 基因的克隆、原核表达 | 第33-47页 |
| 1 主要材料试剂 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-36页 |
| ·LB 培养基 | 第33-34页 |
| ·质粒提取相关试剂 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞制备的相关试剂 | 第35页 |
| ·核酸胶配制相关试剂 | 第35页 |
| ·蛋白胶配制相关试剂 | 第35-36页 |
| 2 方法 | 第36-43页 |
| ·BmCIB 基因的克隆 | 第36-39页 |
| ·表达载体pET-28a(+)质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·PCR 克隆BmCIB 基因 | 第37-38页 |
| ·回收、纯化扩增片段 | 第38页 |
| ·载体pET-28a(+)与BmCIB 基因扩增片段的双酶切 | 第38-39页 |
| ·回收、纯化载体与扩增片段的双酶切产物 | 第39页 |
| ·pET-28a(+)-BmCIB 重组质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·载体pET-28a(+)与BmCIB 基因的连接 | 第39页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定与测序 | 第40-41页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的原核表达 | 第41-43页 |
| ·重组质粒的转化 | 第41页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE 分析重组蛋白的表达情况 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| ·BmCIB 基因的克隆 | 第43页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的测序 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 BmCIB 蛋白的纯化及多克隆抗体制备 | 第47-58页 |
| 1 主要材料、试剂及仪器 | 第47-50页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47-50页 |
| ·包涵体的处理试剂 | 第47-48页 |
| ·His 亲和层析纯化用试剂 | 第48页 |
| ·弗氏不完全佐剂 | 第48页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第48页 |
| ·ELISA 相关试剂 | 第48-49页 |
| ·Western blotting 用试剂 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·重组Bm CIB 蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·包涵体的处理 | 第50页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白分子量的质谱鉴定 | 第51页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第51-54页 |
| ·抗原的制备 | 第51页 |
| ·免疫新西兰大白兔 | 第51页 |
| ·多克隆抗体血清的制备 | 第51-52页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第52-53页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第53页 |
| ·抗体纯化 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第54页 |
| ·重组蛋白分子量的质谱鉴定 | 第54页 |
| ·抗体效价 | 第54-55页 |
| ·抗体的特异性 | 第55-56页 |
| ·抗体纯化 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 BmCIB 的表达分析 | 第58-69页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·试剂及仪器 | 第58-59页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第58-59页 |
| ·Bradford 蛋白定量用试剂 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-63页 |
| ·家蚕各时期及五龄幼虫各组织总RNA 的提取 | 第59-60页 |
| ·用Rnase-FreeDNase 消化总RNA 中残留的基因组DNA | 第60页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第60-61页 |
| ·家蚕各时期及五龄幼虫各组织总蛋白的提取 | 第61页 |
| ·荧光定量PCR 检测BmCIB 基因在家蚕各时期和五龄幼虫各组织的mRNA 转录水平 | 第61-63页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第61-62页 |
| ·荧光定量PCR | 第62页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第62-63页 |
| ·Western blotting 检测BmCIB 蛋白的分布 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-67页 |
| ·BmCIB 基因在家蚕各时期的mRNA 转录水平 | 第63-64页 |
| ·BmCIB 蛋白在家蚕各时期的表达水平 | 第64-65页 |
| ·BmCIB 基因在家蚕五龄幼虫各组织的mRNA 转录水平 | 第65-67页 |
| ·BmCIB 蛋白在家蚕五龄幼虫各组织中的分布 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 BmCIB 蛋白的亚细胞定位 | 第69-73页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第69-70页 |
| ·材料仪器 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69-70页 |
| 2 方法 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
