| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第10-11页 |
| 1.2 Bt毒素的命名与分类 | 第11-12页 |
| 1.3 杀虫晶体蛋白及其作用机理 | 第12-17页 |
| 1.3.1 Cry毒素 | 第12-16页 |
| 1.3.2 Cyt毒素 | 第16-17页 |
| 1.4 苏云金芽胞杆菌的应用 | 第17-18页 |
| 1.4.1 Bt生物杀虫剂 | 第17-18页 |
| 1.4.2 Bt转基因抗虫植物 | 第18页 |
| 1.5 Bt杀虫基因鉴定方法 | 第18-23页 |
| 1.5.1 多重PCR | 第19页 |
| 1.5.2 Exclusive PCR | 第19-20页 |
| 1.5.3 PCR-Restriction fragment length polymorphism | 第20-21页 |
| 1.5.4 PCR-High resolution melting | 第21-22页 |
| 1.5.5 PCR-High throughput sequencing | 第22-23页 |
| 1.5.6 宏基因组-PCR | 第23页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第23-26页 |
| 第二章 Redundant Exclusion PCR方法的建立及新基因克隆 | 第26-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 PCR通用引物设计 | 第26-29页 |
| 2.2.2 Bt基因组池的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.3 Bt基因组池中cry8及cry9类基因鉴定 | 第30-33页 |
| 2.2.4 Redundant Exclusion引物设计 | 第33-37页 |
| 2.2.5 Redundant Exclusion引物评估 | 第37-38页 |
| 2.2.6 Redundant Exclusion PCR | 第38页 |
| 2.2.7 Redundant Exclusion PCR产物中cry8和cry9类基因型鉴定 | 第38页 |
| 2.2.8 新基因序列分析 | 第38页 |
| 2.3 结果 | 第38-44页 |
| 2.3.1 Bt基因组池的构建 | 第38-39页 |
| 2.3.2 Bt基因组池中cry8及cry9类基因鉴定 | 第39-42页 |
| 2.3.3 Redundant Exclusion引物评估 | 第42-43页 |
| 2.3.4 Redundant Exclusion PCR | 第43-44页 |
| 2.3.5 新基因序列分析 | 第44页 |
| 2.4 小结 | 第44-46页 |
| 第三章 cry8-like基因表达及活性分析 | 第46-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.2 供试昆虫 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.2.1 新基因在Bt无晶体突变株中的表达 | 第47-51页 |
| 3.2.2 Hycry8蛋白消化 | 第51页 |
| 3.2.3 蛋白二级质谱鉴定 | 第51页 |
| 3.2.4 生物活性测定 | 第51-52页 |
| 3.3 结果 | 第52-57页 |
| 3.3.1 cry8-like基因在Bt无晶体突变菌株中的表达 | 第52-54页 |
| 3.3.2 二级蛋白质谱鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.3 生物活性分析 | 第55-57页 |
| 3.4 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
