| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 漆酶 | 第12-17页 |
| 1.1.1 漆酶介绍 | 第12页 |
| 1.1.2 漆酶氧化的分子机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 漆酶的分布 | 第13-14页 |
| 1.1.4 漆酶的应用 | 第14-17页 |
| 1.2 染料应用及其问题 | 第17页 |
| 1.3 重组蛋白表达系统 | 第17-21页 |
| 1.3.1 原核表达系统 | 第17-18页 |
| 1.3.2 真核表达系统 | 第18页 |
| 1.3.3 毕赤酵母表达系统 | 第18-19页 |
| 1.3.4 外源蛋白在毕赤酵母中表达水平的影响因素 | 第19-21页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 实验与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂与试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 相关溶液 | 第23-24页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.6 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.7 软件和网站 | 第25页 |
| 2.2 漆酶在毕赤酵母中的表达 | 第25-35页 |
| 2.2.1 漆酶表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.2 重组酵母的构建及筛选 | 第28-30页 |
| 2.2.3 重组酵母产酶发酵 | 第30-31页 |
| 2.2.4 漆酶酶活测定 | 第31-32页 |
| 2.2.5 漆酶酶学性质 | 第32-33页 |
| 2.2.6 发酵条件优化 | 第33页 |
| 2.2.7 漆酶在染料脱色中的应用 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-50页 |
| 3.1 密码子优化 | 第35-37页 |
| 3.1.1 毕赤酵母密码子使用偏好 | 第35页 |
| 3.1.2 密码子优化结果分析 | 第35-37页 |
| 3.2 表达载体构建 | 第37-39页 |
| 3.2.1 片段扩增 | 第37-38页 |
| 3.2.2 转化子验证 | 第38-39页 |
| 3.3 遗传霉素平板筛选 | 第39页 |
| 3.4 高表达漆酶的菌株筛选 | 第39-40页 |
| 3.5 酶学性质 | 第40-45页 |
| 3.5.1 酶反应的最适温度及酶的热稳定性 | 第40-42页 |
| 3.5.2 酶反应的最适pH | 第42页 |
| 3.5.3 Cu~(2+)浓度对酶活力的影响 | 第42-43页 |
| 3.5.4 EDTA/PMSF对漆酶活力的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.5 常见金属离子对漆酶活力的影响 | 第44-45页 |
| 3.5.6 有机试剂对漆酶活力的影响 | 第45页 |
| 3.6 发酵条件优化 | 第45-48页 |
| 3.6.1 甲醇添加量的优化 | 第45-46页 |
| 3.6.2 Tween 80添加量的优化 | 第46-48页 |
| 3.7 染料脱色 | 第48-50页 |
| 4 讨论与展望 | 第50-55页 |
| 4.1 基因序列的优化 | 第50页 |
| 4.2 基因的剂量效应 | 第50-51页 |
| 4.3 发酵条件优化 | 第51-52页 |
| 4.3.1 甲醇最适添加量 | 第51页 |
| 4.3.2 Tween 80最适添加量 | 第51-52页 |
| 4.4 漆酶的应用 | 第52-55页 |
| 4.4.1 漆酶对染料的脱色作用 | 第52-53页 |
| 4.4.2 漆酶在秸秆发酵中的应用 | 第53页 |
| 4.4.3 漆酶降解黄曲霉毒素 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 研究生工作期间取得的成果 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |