| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词简表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-18页 |
| ·背景 | 第13-17页 |
| ·辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶NRDR 与维甲酸atRA | 第13-14页 |
| ·原核表达载体、原核表达和入门克隆技术Gateway Technology | 第14-16页 |
| ·多克隆抗体 | 第16-17页 |
| ·本项研究课题的研究意义 | 第17页 |
| ·研究目标与研究内容 | 第17-18页 |
| ·研究目标 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 大鼠、小鼠、猪DHRS4编码区cDNA克隆 | 第18-29页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·动物来源 | 第18页 |
| ·细菌和载体 | 第18页 |
| ·主要试剂盒及试剂配制 | 第18-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-26页 |
| ·组织 | 第20-21页 |
| ·提取肝组织总RNA | 第21页 |
| ·RNA 逆转录成cDNA | 第21-22页 |
| ·PCR 扩增DHRS4 cDNA | 第22-23页 |
| ·胶回收目的片段 | 第23页 |
| ·将目的片段连接至pGEM-T 质粒 | 第23-24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·重组质粒的初步筛选 | 第24-25页 |
| ·测序确认 | 第25-26页 |
| ·实验结果 | 第26-29页 |
| ·总RNA 浓度 | 第26页 |
| ·全长cDNA 的克隆 | 第26页 |
| ·大鼠、小鼠、猪DHRS4 克隆片段的鉴定 | 第26-29页 |
| 第三章 大鼠、小鼠、猪DHRS4表达载体的构建、表达和纯化 | 第29-44页 |
| ·实验材料 | 第29-32页 |
| ·菌种及质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂盒及试剂配制 | 第29-31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·提取重组质粒 | 第33-34页 |
| ·扩增带attB 重组位点的DHRS4 PCR 片段 | 第34-35页 |
| ·入门克隆的构建 | 第35-36页 |
| ·入门克隆的鉴定 | 第36页 |
| ·表达克隆的构建 | 第36-37页 |
| ·表达克隆的表达及纯化 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-44页 |
| ·带attB 重组位点的修饰 | 第38-39页 |
| ·菌落PCR 确认入门克隆 | 第39-40页 |
| ·测序确认入门克隆 | 第40页 |
| ·菌落PCR 确认表达克隆 | 第40页 |
| ·大鼠、小鼠、猪DHRS4 在BL21-AI~(TM)细胞中的表达 | 第40-42页 |
| ·蛋白纯化 | 第42-44页 |
| 第四章 小鼠DHRS4多克隆抗体的制备 | 第44-49页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂盒及试剂配制 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·抗原制备 | 第45页 |
| ·抗血清的制备 | 第45-46页 |
| ·血清处理、储存 | 第46页 |
| ·抗体纯化 | 第46-47页 |
| ·抗体效价及特异性检测 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-49页 |
| ·小鼠DHRS4 抗体效价检测 | 第48页 |
| ·小鼠DHRS4 抗体特异性检测 | 第48-49页 |
| 第五章 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第56-57页 |
| 个人简介 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
