| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 糙皮侧耳概况 | 第12页 |
| 2 2-Cys Prx基因研究进展 | 第12-16页 |
| 2.1 过氧化物还原酶简介 | 第13页 |
| 2.2 2-Cys Prx的催化循环 | 第13-14页 |
| 2.3 2-Cys Prx基因的结构特点 | 第14-15页 |
| 2.4 2-Cys Prx基因在氧化应激下的功能转换 | 第15页 |
| 2.5 2-Cys Prx基因功能 | 第15-16页 |
| 3 根癌农杆菌介导的高等真菌的遗传转化 | 第16-19页 |
| 3.1 根癌农杆菌介导的转化机制 | 第17页 |
| 3.2 影响根癌农杆菌介导转化的因素 | 第17-18页 |
| 3.3 农杆菌介导转化法在食用菌中的应用 | 第18-19页 |
| 4 基因功能的研究方法 | 第19-22页 |
| 4.1 基因敲除技术 | 第19页 |
| 4.2 RNAi技术及应用 | 第19-21页 |
| 4.2.1 RNAi作用机制 | 第19-21页 |
| 4.2.2 RNAi技术在真菌基因功能领域的应用 | 第21页 |
| 4.3 超表达技术 | 第21-22页 |
| 5 本课题研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 2-Cys Prx基因超表达载体和沉默载体的构建 | 第23-59页 |
| 1 材料与方法 | 第23-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 1.1.1 菌株 | 第23页 |
| 1.1.2 质粒载体 | 第23-25页 |
| 1.1.3 培养基 | 第25页 |
| 1.1.4 实验试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.5 溶液配制 | 第26-27页 |
| 1.1.6 设备仪器 | 第27-28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-43页 |
| 1.2.1 菌种保藏与菌株培养 | 第28-29页 |
| 1.2.2 糙皮侧耳核酸的提取 | 第29-30页 |
| 1.2.3 cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 1.2.4 糙皮侧耳2-Cys Prx基因扩增及生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 1.2.5 2-Cys Prx基因超表达片段的扩增 | 第32-33页 |
| 1.2.6 PCR产物回收纯化 | 第33-34页 |
| 1.2.7 目的片段与T载体连接 | 第34页 |
| 1.2.8 重组质粒的热击转化 | 第34页 |
| 1.2.9 重组质粒的筛选、鉴定和质粒提取 | 第34-35页 |
| 1.2.10 2-Cys Prx基因超表达载体的构建 | 第35-38页 |
| 1.2.11 超表达载体的根癌农杆菌电击转化 | 第38-39页 |
| 1.2.12 根癌农杆菌超表达载体的鉴定 | 第39页 |
| 1.2.13 2-Cys Prx基因沉默片段的扩增 | 第39-40页 |
| 1.2.14 2-Cys Prx基因沉默载体的构建 | 第40-42页 |
| 1.2.15 沉默载体电击转化 | 第42页 |
| 1.2.16 根癌农杆菌沉默载体的鉴定 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-56页 |
| 2.1 糙皮侧耳基因组DNA及总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2 糙皮侧耳2-Cys Prx基因克隆及生物信息学分析 | 第44-47页 |
| 2.3 2-Cys Prx基因超表达片段的扩增 | 第47-49页 |
| 2.4 2-Cys Prx基因超表达载体的构建及其验证 | 第49-51页 |
| 2.5 超表达载体电击转入根癌农杆菌的鉴定 | 第51-52页 |
| 2.6 2-Cys Prx基因沉默片段的克隆 | 第52-53页 |
| 2.7 2-Cys Prx基因沉默载体的构建及验证 | 第53-55页 |
| 2.8 沉默载体转入根癌农杆菌的鉴定 | 第55-56页 |
| 3 小结与讨论 | 第56-59页 |
| 3.1 小结 | 第56页 |
| 3.2 讨论 | 第56-59页 |
| 3.2.1 2-Cys Prx基因分布及功能 | 第56-57页 |
| 3.2.2 构建hpRNA表达载体目标片段的选择 | 第57-59页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导糙皮侧耳遗传转化及2-Cys Prx基因功能的初步验证 | 第59-75页 |
| 1 材料与方法 | 第59-64页 |
| 1.1 材料 | 第59-60页 |
| 1.1.1 菌株及载体 | 第59页 |
| 1.1.2 根癌农杆菌介导转化培养基 | 第59页 |
| 1.1.3 其他试剂及溶液 | 第59-60页 |
| 1.2 方法 | 第60-64页 |
| 1.2.1 根癌农杆菌介导糙皮侧耳菌丝体的遗传转化 | 第60-61页 |
| 1.2.2 转化子的遗传稳定性与PCR验证 | 第61-62页 |
| 1.2.3 转化子中绿色荧光蛋白基因表达检测 | 第62页 |
| 1.2.4 转化子的qRT-PCR验证 | 第62-63页 |
| 1.2.5 转化子的生长速度及菌丝形态观察 | 第63页 |
| 1.2.6 转化子非生物逆境胁迫试验 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-73页 |
| 2.1 转化子的验证 | 第64-69页 |
| 2.1.1 转化子的稳定性和PCR验证 | 第64-66页 |
| 2.1.2 转化子绿色荧光蛋白基因的表达检测 | 第66-68页 |
| 2.1.3 转化子的qRT-PCR检测 | 第68-69页 |
| 2.2 转化子形态特征 | 第69-71页 |
| 2.2.1 菌丝生长速度 | 第69页 |
| 2.2.2 菌丝形态 | 第69-70页 |
| 2.2.3 菌落形态 | 第70-71页 |
| 2.3 H2O2胁迫试验 | 第71页 |
| 2.4 高盐胁迫试验 | 第71-72页 |
| 2.5 高温胁迫试验 | 第72-73页 |
| 3 小结与讨论 | 第73-75页 |
| 3.1 小结 | 第73页 |
| 3.2 讨论 | 第73-75页 |
| 第四章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 1 结论 | 第75页 |
| 2 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 在读期间发表论文 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
