| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 克雷伯肺炎杆菌简介 | 第10-11页 |
| 1.2 生物群体效应 | 第11-12页 |
| 1.2.1 LuxS蛋白的研究背景 | 第11页 |
| 1.2.2 AI-2 分子结构 | 第11-12页 |
| 1.2.3 LuxS蛋白结构 | 第12页 |
| 1.3 木糖酸的简介 | 第12-13页 |
| 1.4 木糖酸的合成方法 | 第13-15页 |
| 1.4.1 木糖酸的化学合成 | 第13页 |
| 1.4.1.1 木糖酸的碘催化合成 | 第13页 |
| 1.4.1.2 木糖酸的钯催化合成 | 第13页 |
| 1.4.2 木糖酸的生物合成 | 第13-14页 |
| 1.4.3 发酵法生产木糖酸 | 第14-15页 |
| 1.4.3.1 生产菌株 | 第14页 |
| 1.4.3.2 木糖酸的发酵工艺 | 第14-15页 |
| 1.5 选题的目的及意义 | 第15-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-30页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.2 酶和主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第21-25页 |
| 2.1.4 实验用到的溶液和配制方法 | 第25-27页 |
| 2.1.5 发酵培养基配方 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 基因组和质粒的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 设计引物和PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.3 TA克隆与连接 | 第31-32页 |
| 2.2.4 化学转化感受态大肠杆菌DH5α的制备方法及化转步骤 | 第32-33页 |
| 2.2.5 电击转化克雷伯肺炎杆菌感受态细胞的制备及电转方法 | 第33页 |
| 2.2.6 敲除克雷伯肺炎杆菌基因的方法 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 构建同源重组质粒 | 第33-34页 |
| 2.2.6.2 敲除克雷伯肺炎杆菌基因组上的基因 | 第34页 |
| 2.2.7 在M9培养基中测定生长曲线 | 第34-35页 |
| 2.2.8 发酵培养克雷伯肺炎杆菌及突变菌株 | 第35-36页 |
| 2.2.9 酶活的测定 | 第36-39页 |
| 2.2.9.1 细胞预处理以及酶活性的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.9.2 DCIP浓度与吸光度变化的标准曲线 | 第37页 |
| 2.2.9.3 蛋白质含量的测定方法 | 第37-39页 |
| 2.2.10 发酵液中各物质的分析方法 | 第39-42页 |
| 2.2.10.1 测定方法 | 第39页 |
| 2.2.10.2 各待测样品标准曲线的制备 | 第39-42页 |
| 第3章 构建克雷伯肺炎杆菌突变株 | 第42-49页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 克雷伯肺炎杆菌突变菌株的构建过程 | 第42-46页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第42-43页 |
| 3.2.2 构建敲除用重组质粒 T-ΔGalp（Stre) | 第43-44页 |
| 3.2.3 敲除克雷伯肺炎杆菌基因组上的Galp基因 | 第44-46页 |
| 3.2.4 消除重组菌株上抗性基因 | 第46页 |
| 3.3 本章小结 | 第46-49页 |
| 第4章 克雷伯肺炎杆菌葡萄糖氧化途径的研究 | 第49-56页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 测定克雷伯肺炎杆菌及突变菌株在有氧条件下的生长曲线 | 第49-53页 |
| 4.3 测定克雷伯肺炎杆菌及突变菌株在无氧状态下生长状态 | 第53-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第5章 有关克雷伯肺炎杆菌生物群体效应的研究 | 第56-67页 |
| 5.1 引言 | 第56-57页 |
| 5.2 克雷伯肺炎杆菌及 Lux S 突变菌株生产 2,3-丁二醇的研究 | 第57-60页 |
| 5.3 克雷伯肺炎杆菌及 Lux S 突变菌株生产 1,3-丙二醇的研究 | 第60-62页 |
| 5.4 克雷伯肺炎杆菌及LuxS突变菌株生产乙偶姻的研究 | 第62-65页 |
| 5.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 第6章 利用克雷伯肺炎杆菌突变菌株发酵生产葡萄糖酸的研究 | 第67-75页 |
| 6.1 引言 | 第67页 |
| 6.2 利用克雷伯肺炎杆菌突变株kpΔgad生产葡萄糖酸 | 第67-70页 |
| 6.2.1 在突变株kpΔgad的基础上构建多突变菌株生产葡萄糖酸 | 第67-69页 |
| 6.2.2 新型突变株在中性条件下发酵生产葡萄糖酸 | 第69-70页 |
| 6.3 在不同的温度下kpΔgad发酵生产葡萄糖酸 | 第70-72页 |
| 6.4 本章小结 | 第72-75页 |
| 第7章 克雷伯肺炎杆菌代谢产物-木糖酸发现与鉴定 | 第75-89页 |
| 7.1 引言 | 第75页 |
| 7.2 以不同底物为碳源时葡萄糖酸脱氢酶酶活性的测定 | 第75-76页 |
| 7.3 以不同底物为碳源时葡萄糖脱氢酶酶活性的测定 | 第76-77页 |
| 7.4 kpΔgad利用木糖进行发酵实验 | 第77-79页 |
| 7.5 木糖酸结构鉴定 | 第79-81页 |
| 7.5.1 从发酵液中提纯木糖酸 | 第79页 |
| 7.5.2 核磁分析 | 第79-81页 |
| 7.6 利用克雷伯肺炎杆菌及其突变株生产木糖酸 | 第81-87页 |
| 7.6.1 木糖酸的发酵实验 | 第81-86页 |
| 7.6.2 连续补料发酵生产木糖酸 | 第86-87页 |
| 7.7 本章小结 | 第87-89页 |
| 结论 | 第89-91页 |
| 展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-97页 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 附表 1 | 第99-102页 |
| 附表 2 | 第102-109页 |
