| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 研究背景 | 第10-14页 |
| 1.1 NF-κB信号通路 | 第10-11页 |
| 1.2 ClC-3氯通道蛋白 | 第11-12页 |
| 1.3 肿瘤耐药与 P-gp | 第12页 |
| 1.4 NF-κB信号通路与P-gp | 第12-13页 |
| 1.5 ClC-3与P-gp | 第13-14页 |
| 2 研究目的 | 第14-15页 |
| 2.1 确定NF-кB信号通路参与ClC-3调控P-gp的表达过程 | 第14页 |
| 2.2 明确ClC-3通过激活NF-κB信号通路上调P-gp的表达从而介导肿瘤细胞耐药 | 第14-15页 |
| 3 研究思路 | 第15页 |
| 4 研究内容 | 第15-16页 |
| 4.1 NF-κB信号通路参与ClC-3调控P-gp的表达过程 | 第15页 |
| 4.2 ClC-3通过NF-κB信号通路调控P-gp介导肿瘤细胞耐药的机制 | 第15-16页 |
| 5 材料 | 第16-23页 |
| 5.1 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 5.2 细胞株、质粒、Si RNA | 第17-18页 |
| 5.3 抗体来源 | 第18-19页 |
| 5.4 荧光定量PCR引物序列 | 第19页 |
| 5.5 主要试剂 | 第19-21页 |
| 5.5.1 细胞培养所需药物和试剂 | 第19页 |
| 5.5.2 质粒提取及转染所需试剂 | 第19-20页 |
| 5.5.3 蛋白免疫印迹所需试剂 | 第20页 |
| 5.5.4 细胞免疫荧光所需试剂 | 第20-21页 |
| 5.5.5 双萤光素酶报告基因系统所需试剂 | 第21页 |
| 5.5.6 荧光定量PCR所需试剂 | 第21页 |
| 5.5.7 MTT所需要试剂 | 第21页 |
| 5.6 主要溶液配方 | 第21-23页 |
| 6 方法 | 第23-34页 |
| 6.1 细胞培养 | 第23页 |
| 6.2 pRL-TK-Vector质粒的转化、扩增以及提取 | 第23-25页 |
| 6.2.1 pRL-TK-Vector质粒转化 | 第23-24页 |
| 6.2.2 转化后菌种的挑取以及扩增 | 第24页 |
| 6.2.3 质粒提取 | 第24页 |
| 6.2.4 质粒浓度测定 | 第24-25页 |
| 6.3 细胞转染 | 第25-26页 |
| 6.3.1 pcDNA3.1/ClC-3质粒转染 | 第25页 |
| 6.3.2 NF-κB P65 Si RNA转染 | 第25页 |
| 6.3.3 pcDNA3.1/ClC-3、p-NF-κB-luc、pRL-TK-Vector三质粒共转染 | 第25-26页 |
| 6.3.4 NF-κB P65 Si RNA、pcDNA3.1/ClC-3 共同转染 | 第26页 |
| 6.4 Western blot | 第26-28页 |
| 6.4.1 细胞蛋白的提取 | 第26页 |
| 6.4.2 蛋白浓度测定 | 第26页 |
| 6.4.3 Western blot | 第26-28页 |
| 6.5 细胞免疫荧光 | 第28-29页 |
| 6.6 双荧光素酶报告基因系统 | 第29-31页 |
| 6.7 实时荧光定量PCR | 第31-33页 |
| 6.7.1 细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| 6.7.2 逆转录 | 第31页 |
| 6.7.3 实时荧光定量PCR | 第31-33页 |
| 6.8 MTT法 | 第33-34页 |
| 6.8.1 筛选适宜的药物浓度 | 第33页 |
| 6.8.2 转染及药物处理 | 第33-34页 |
| 6.9 统计学分析 | 第34页 |
| 7 实验结果 | 第34-47页 |
| 7.1 相对于MCF-7，MCF-7/ADR中NF-κB信号通路蛋白IKKα、IKKβ、NF-кBP65高表达，IκBα 低表达 | 第34-36页 |
| 7.2 增强MCF-7 细胞ClC-3 表达激活NF-κB信号通路 | 第36-39页 |
| 7.2.1 IKKα、IKKβ、Phospho- IκBα（ser32）、P65蛋白表达提高 | 第36-37页 |
| 7.2.2 NF-κB P65转移入核 | 第37-38页 |
| 7.2.3 NF-κB P65转录活性提高 | 第38-39页 |
| 7.3 LPS和P65 Si RNA分别上调和下调MDR1 mRNA和P-gp的表达 | 第39-41页 |
| 7.4 增强ClC-3 并抑制NF-κB P65表达不能上调MCF-7 细胞P-gp的表达 | 第41-45页 |
| 7.5 增强ClC-3 并抑制NF-κB P65表达不能降低MCF-7 细胞对抗癌药物敏感性 | 第45-47页 |
| 8 讨论 | 第47-51页 |
| 9 小结 | 第51页 |
| 10 结论 | 第51-52页 |
| References | 第52-59页 |
| 附录一 硕士期间发表的论文 | 第59-60页 |
| 附录二 中英文缩写词对照表 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
