| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 氧化葡萄糖酸杆菌 | 第11-17页 |
| 1.1.1 属性和特征 | 第11页 |
| 1.1.2 多羟基脱氢酶 | 第11-13页 |
| 1.1.3 氧化葡萄糖酸杆菌的应用 | 第13-17页 |
| 1.2 氧化葡萄糖酸杆菌基因表达载体的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 质粒pBBR1MCS及其衍生质粒研究现状 | 第18-21页 |
| 1.2.2 以氧化葡萄糖酸杆菌内源性质粒为基础构建载体的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.3 质粒拷贝数提高方法的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4 2-酮基葡萄糖酸研究现状 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的内容和意义 | 第25-27页 |
| 第2章 适用于氧化葡萄糖酸杆菌高效基因表达载体的构建 | 第27-53页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第27-29页 |
| 2.2.2 培养基 | 第29页 |
| 2.2.3 实验试剂与仪器 | 第29-31页 |
| 2.2.4 实验引物 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.3.1 细菌培养条件 | 第31-32页 |
| 2.3.2 质粒的抽提 | 第32页 |
| 2.3.3 质粒基因定点突变 | 第32-34页 |
| 2.3.4 基因组抽提 | 第34页 |
| 2.3.5 基因PCR扩增 | 第34页 |
| 2.3.6 PCR产物的电泳及切胶回收 | 第34-35页 |
| 2.3.7 DNA酶切 | 第35页 |
| 2.3.8 DNA的纯化 | 第35页 |
| 2.3.9 DNA的连接 | 第35页 |
| 2.3.10 重组质粒的转化与阳性克隆的验证 | 第35页 |
| 2.3.11 重组质粒转化G. oxydans DSM 2003 | 第35-36页 |
| 2.3.12 RNA的提取 | 第36页 |
| 2.3.13 RNA的反转录 | 第36-37页 |
| 2.3.14 质粒相对拷贝数的测定 | 第37-38页 |
| 2.3.15 实时荧光定量PCR检测GFP转录水平 | 第38页 |
| 2.3.16 荧光共聚焦显微镜检测GFP的表达 | 第38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-51页 |
| 2.4.1 质粒pBBR1MCS-5突变衍生质粒的构建 | 第38-42页 |
| 2.4.2 质粒在G.oxydans DSM 2003中的拷贝数测定 | 第42-46页 |
| 2.4.3 各质粒在G.oxydans DSM 2003中表达异源基因GFP | 第46-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 第3章 高产2-酮基-D-葡萄糖酸的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌的构建 | 第53-68页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第54页 |
| 3.2.2 培养基 | 第54页 |
| 3.2.3 实验试剂与仪器 | 第54-55页 |
| 3.2.4 实验引物 | 第55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-59页 |
| 3.3.1 细菌培养条件 | 第55页 |
| 3.3.2 质粒的抽提 | 第55页 |
| 3.3.3 基因组抽提 | 第55页 |
| 3.3.4 基因PCR扩增、电泳及胶回收 | 第55页 |
| 3.3.5 DNA酶切、纯化和连接 | 第55页 |
| 3.3.6 重组质粒的转化与阳性克隆的验证 | 第55-56页 |
| 3.3.7 重组质粒转化G.oxydans DSM 2003 | 第56页 |
| 3.3.8 RNA的提取与反转录 | 第56页 |
| 3.3.9 实时荧光定量PCR检测ga2dh转录水平 | 第56页 |
| 3.3.10 发酵罐中氧化葡萄糖酸杆菌的培养 | 第56页 |
| 3.3.11 静息细胞的制备 | 第56页 |
| 3.3.12 氧化GA生产2KGA的催化反应 | 第56-57页 |
| 3.3.13 分析方法 | 第57-59页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第59-67页 |
| 3.4.1 高产2KGA的氧化葡萄糖酸杆菌菌株的构建 | 第59-61页 |
| 3.4.2 各过表达菌ga2dh转录水平的测定 | 第61-63页 |
| 3.4.3 各过表达菌摇瓶反应效率的测定 | 第63-64页 |
| 3.4.4 高产2KGA菌株反应体系的放大 | 第64-65页 |
| 3.4.5 高产2KGA菌株反应潜力的研究 | 第65-67页 |
| 3.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第4章 总结与展望 | 第68-71页 |
| 4.1 结论 | 第68-69页 |
| 4.2 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
