| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 一、重组质粒的构建和鉴定 | 第16-22页 |
| 1. 材料及仪器设备 | 第16-18页 |
| 1.1 质粒 | 第16页 |
| 1.2 引物 | 第16页 |
| 1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 1.4 主要仪器 | 第16-18页 |
| 2. 方法 | 第18-21页 |
| 2.1 PCR扩增目的片段 | 第18页 |
| 2.2 PCR产物回收(胶回收试剂盒) | 第18-19页 |
| 2.3 目的片段酶切和连接 | 第19页 |
| 2.4 连接产物在E.coli DH5α感受态细胞中转化 | 第19页 |
| 2.5 单克隆菌培养 | 第19页 |
| 2.6 提取质粒(质粒小量提取试剂盒) | 第19-20页 |
| 2.7 重组质粒鉴定 | 第20-21页 |
| 3. 结果 | 第21-22页 |
| 3.1 PCR扩增目的片段 | 第21页 |
| 3.2 重组质粒pSC11-S的鉴定 | 第21-22页 |
| 二、表达HBsAg基因的重组MVA构建和鉴定 | 第22-30页 |
| 1. 材料及仪器设备 | 第22-24页 |
| 1.1 病毒、细胞和鸡胚 | 第22页 |
| 1.2 引物 | 第22页 |
| 1.3 试剂 | 第22-23页 |
| 1.4 主要仪器与耗材 | 第23-24页 |
| 2. 方法 | 第24-28页 |
| 2.1 重组MVA构建 | 第24页 |
| 2.2 鸡胚成纤维细胞(Chick Embryo Fibroblast, CEF)制备 | 第24页 |
| 2.3 重组病毒单个蓝斑筛选 | 第24-25页 |
| 2.4 重组病毒鉴定 | 第25-28页 |
| 2.4.1 病毒DNA提取 | 第25-26页 |
| 2.4.2 PCR扩增 | 第26页 |
| 2.4.3 Western Blot鉴定HBsAg表达 | 第26-28页 |
| 3. 结果 | 第28-30页 |
| 3.1 重组MVA-S筛选 | 第28页 |
| 3.2 重组病毒MVA-S鉴定 | 第28-30页 |
| 3.2.1 PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2.2 Western Blot鉴定 | 第29-30页 |
| 三、重组病毒MVA-S在小鼠体内的免疫 | 第30-43页 |
| 1. 材料 | 第30-32页 |
| 1.1 小鼠免疫物 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 刺激肽序列 | 第31页 |
| 1.4 主要仪器及耗材 | 第31页 |
| 1.5 实验小鼠 | 第31-32页 |
| 2. 方法 | 第32-39页 |
| 2.1 免疫物准备 | 第32-35页 |
| 2.2 小鼠免疫方案 | 第35-37页 |
| 2.3 ELISpot检测细胞免疫应答水平 | 第37-38页 |
| 2.4 统计分析 | 第38-39页 |
| 3. 结果 | 第39-43页 |
| 3.1 病毒滴度测定结果 | 第39页 |
| 3.2 ELISpot检测特异性细胞免疫应答水平 | 第39-43页 |
| 讨论 | 第43-45页 |
| 总结 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 附录 | 第50-65页 |
| 文献综述 | 第65-78页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
