| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 论文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-37页 |
| 1.1 粘细菌概述 | 第13-17页 |
| 1.1.1 粘细菌的特征 | 第13-15页 |
| 1.1.2 粘细菌是次级代谢产物的微生物工厂 | 第15-17页 |
| 1.2 埃博霉素概述 | 第17-19页 |
| 1.2.1 埃博霉素生产菌株特征 | 第17-18页 |
| 1.2.2 埃博霉素基因簇异源表达 | 第18-19页 |
| 1.3 CRISPR-CAS系统概述 | 第19-33页 |
| 1.3.1 CRISPR-Cas发展历程 | 第19-23页 |
| 1.3.2 CRISPR-Cas系统的分类 | 第23-28页 |
| 1.3.3 CRISPR-Cas9系统的作用机制 | 第28-29页 |
| 1.3.4 CRISPR-Cas9系统的应用 | 第29-32页 |
| 1.3.5 CRISPR-Cas9系统展望 | 第32-33页 |
| 1.4 开展本课题的思路及研究内容 | 第33-37页 |
| 第二章 在黄色粘球细菌中构建CRISPR-DCAS9系统 | 第37-59页 |
| 2.1 实验材料和仪器试剂 | 第39-43页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第39-40页 |
| 2.1.2 培养基和溶液 | 第40-41页 |
| 2.1.3 耗材与仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.1.4 酶与试剂盒 | 第42页 |
| 2.1.5 分析工具 | 第42-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.2.1 密码子优化 | 第43页 |
| 2.2.2 cas9基因核酸酶位点突变 | 第43-45页 |
| 2.2.3 sgRNA的设计及表达载体的选择 | 第45-50页 |
| 2.2.4 验证构建好的CRISPR-dCas9系统 | 第50-53页 |
| 2.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 2.3.1 密码子优化结果 | 第53页 |
| 2.3.2 cas9基因核酸酶位点突变 | 第53-54页 |
| 2.3.3 sgRNA设计结果 | 第54-55页 |
| 2.3.4 验证构建好的CRISPR-dCas9系统 | 第55-58页 |
| 2.4 实验讨论 | 第58-59页 |
| 第三章 CRISPR-DCAS9系统效率的测定和优化 | 第59-70页 |
| 3.1 实验材料 | 第61-63页 |
| 3.1.1 实验菌株与质粒 | 第61-62页 |
| 3.1.2 主要培养基 | 第62页 |
| 3.1.3 实验试剂和试剂盒 | 第62页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第62-63页 |
| 3.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 3.2.1 更换dCas9基因的启动子 | 第63页 |
| 3.2.2 sgRNA靶向同一基因的不同位置 | 第63-64页 |
| 3.2.3 CRISPR-dcas9系统抑制效率的测定 | 第64-65页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第65-69页 |
| 3.3.1 更换mxdCas9基因的启动子 | 第65-67页 |
| 3.3.2 sgRNA靶向同一基因(difA)的不同位置 | 第67-68页 |
| 3.3.3 CRISPR-mxdcas9系统抑制效率的测定 | 第68-69页 |
| 3.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第四章 CRISPR-DCAS9的应用 | 第70-83页 |
| 4.1 实验材料和仪器试剂 | 第72-74页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第72-73页 |
| 4.1.2 培养基和溶液 | 第73页 |
| 4.1.3 耗材与仪器设备 | 第73页 |
| 4.1.4 酶与试剂盒 | 第73-74页 |
| 4.2 实验方法 | 第74-77页 |
| 4.2.1 CRISPR-dcas9系统抑制抑制脂肪酸合成 | 第74-75页 |
| 4.2.2 CRISPR-dcas9系统抑制转化甲基丙二酸单酰辅酶A的酶 | 第75页 |
| 4.2.3 CRISPR-dcas9+activator系统激活预测到的埃博霉素基因簇的启动子 | 第75页 |
| 4.2.4 菌株产埃博霉素能力检测 | 第75-77页 |
| 4.3 实验结果 | 第77-82页 |
| 4.3.1 系统抑制抑制脂肪酸合成质粒构建结果 | 第77-78页 |
| 4.3.2 抑制转化甲基丙二酸单酰辅酶A的酶质粒构建结果 | 第78页 |
| 4.3.3 激活预测到的埃博霉素基因簇的启动子质粒构建 | 第78-79页 |
| 4.3.4 抑制菌株埃博霉素生产能力检测 | 第79-82页 |
| 4.4 实验讨论 | 第82-83页 |
| 全文总结与展望 | 第83-84页 |
| 附录 文献中用到的主要引物 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第95页 |
