| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第12-39页 |
| 第一章 RNA干扰研究概述 | 第13-27页 |
| 1 RNA干扰现象的发现 | 第13页 |
| 2 RNAI的沉默机制 | 第13-18页 |
| 2.1 基因沉默发生在不同水平 | 第13-14页 |
| 2.2 转录后基因沉默(PTGS)机制 | 第14-16页 |
| 2.3 RNAi的启动 | 第16页 |
| 2.4 形成沉默效应器 | 第16-17页 |
| 2.5 基因沉默信号的放大和蔓延 | 第17-18页 |
| 3 RNAI的生物学功能 | 第18页 |
| 4 卵菌中RNAI技术的应用及发展 | 第18-21页 |
| 4.1 卵菌遗传体系的建立 | 第19页 |
| 4.2 卵菌稳定基因沉默 | 第19页 |
| 4.3 卵菌瞬时基因沉默 | 第19页 |
| 4.4 卵菌基因沉默技术的优化 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-27页 |
| 第二章 人工合成小分子RNA在基因沉默中的应用研究进展 | 第27-39页 |
| 参考文献 | 第31-39页 |
| 下篇 研究内容 | 第39-93页 |
| 第一章 AMIRNA靶标基因的选择及载体的构建 | 第41-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 1.1 amiRNA载体 | 第43页 |
| 1.2 amiRNA靶标序列的设计和比对 | 第43页 |
| 1.3 用于载体克隆的菌株 | 第43页 |
| 1.4 载体的酶切与连接 | 第43页 |
| 1.5 培养基的制备 | 第43-44页 |
| 1.6 大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第44页 |
| 1.7 细菌质粒小量提取和大量提取 | 第44页 |
| 1.8 DNA琼脂糖电泳与DNA回收 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-49页 |
| 2.1 靶标基因PsGK5,PsCDC14,PsAVR3b,PsAVR1d amiRNA的设计 | 第45-46页 |
| 2.2 靶标基因amiRNA序列在大豆疫霉基因组数据库中的比对 | 第46页 |
| 2.3 amiRNA序列的克隆以及转化载体的构建 | 第46-48页 |
| 2.4 串联的amiRNA结构的构建 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第二章 AMIRNA介导大豆疫霉靶标基因的沉默 | 第53-85页 |
| 1 材料与方法 | 第55-59页 |
| 1.1 供试菌株与寄主植物 | 第55页 |
| 1.2 培养基的制备 | 第55页 |
| 1.3 大豆疫霉遗传转化 | 第55-57页 |
| 1.4 amiRNA介导的基因沉默突变体的表型分析 | 第57页 |
| 1.5 amiRNA介导的基因沉默突变体的致病力的测定 | 第57-58页 |
| 1.6 DNA和RNA的提取 | 第58页 |
| 1.7 SYBR green实时定量RT-PCR分析 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-78页 |
| 2.1 amiRNA介导的PsGK5沉默效率的验证及突变体表型的分析 | 第59-63页 |
| 2.2 amiRNA的串联结构介导的PsGK5沉默效率的验证及突变体表型的分析 | 第63-67页 |
| 2.3 amiRNA介导的PsCDC14沉默效率的验证及突变体表型的分析 | 第67-71页 |
| 2.4 amiRNA的串联结构介导的PsCDC14沉默效率的验证及突变体表型的分析 | 第71-74页 |
| 2.5 amiRNA介导的PsAVR3b沉默效率的验证及突变体鉴别寄主实验分析 | 第74-76页 |
| 2.6 amiRNA介导的PsAVR1d沉默效率的验证及突变体鉴别寄主实验分析 | 第76-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 第三章 AMIRNA介导大豆疫霉基因沉默与稳定沉默的对比分析 | 第85-93页 |
| 1 材料与方法 | 第86-87页 |
| 1.1 供试菌株 | 第86页 |
| 1.2 载体构建和大豆疫霉转化 | 第86-87页 |
| 1.3 DNA和RNA的提取 | 第87页 |
| 1.4 SYBR green实时定量RT-PCR分析 | 第87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-89页 |
| 2.1 基于两种沉默方法介导的PsIMPA转化子的沉默效率的验证 | 第87-88页 |
| 2.2 基于两种沉默方法介导的PsIMPA转化子的沉默效率的统计分析 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表的研究论文 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
