| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第5-11页 |
| 绪论 | 第11-19页 |
| 一、转基因动物概述 | 第11-13页 |
| (一) 转基因动物制备方法 | 第11页 |
| (二) 基因动物的应用与进展 | 第11-13页 |
| 二、显微注射技术概述 | 第13-14页 |
| 三、CRISPR/Cas9基因编辑系统概述 | 第14-16页 |
| 四、Trex1基因概述 | 第16-18页 |
| 五、研究目的及意义 | 第18-19页 |
| (一) 研究目的 | 第18页 |
| (二) 研究意义 | 第18-19页 |
| 第一章 材料与方法 | 第19-41页 |
| 1.1 实验动物 | 第19页 |
| 1.2 细胞系 | 第19页 |
| 1.3 实验仪器 | 第19-21页 |
| 1.4 实验试剂及药品 | 第21-22页 |
| 1.4.1 载体构建及验证阶段主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.4.2 注射阶段主要试剂 | 第22页 |
| 1.5 主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 1.5.1 载体构建及验证阶段主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 1.5.2 注射阶段主要试剂的配制 | 第24页 |
| 1.6 实验方法 | 第24-34页 |
| 1.6.1 敲除载体的制备 | 第24-27页 |
| 1.6.2 敲除载体在细胞水平上的验证 | 第27-34页 |
| 1.6.3 sg1RNA及Cas9 mRNA的体外转录 | 第34页 |
| 1.7 制作不育雄鼠的输精管切除术 | 第34页 |
| 1.8 受精卵的获取 | 第34-36页 |
| 1.9 显微注射 | 第36-37页 |
| 1.9.1 显微注射前的准备 | 第36-37页 |
| 1.9.2 显微注射操作 | 第37页 |
| 1.10 输卵管内胚胎移植 | 第37-39页 |
| 1.11 术后小鼠的饲养 | 第39页 |
| 1.12 转基因小鼠的鉴定 | 第39-41页 |
| 1.12.1 基因型鉴定 | 第39页 |
| 1.12.2 WB实验检测生理生化指标 | 第39-41页 |
| 第二章 实验结果 | 第41-53页 |
| 第一节 敲除载体构建及验证 | 第41-45页 |
| 2.1 载体构建 | 第41-42页 |
| 2.2 载体验证 | 第42-45页 |
| 2.2.1 细胞转染效率 | 第42页 |
| 2.2.2 对转染敲除质粒的L929细胞进行PCR验证的结果 | 第42-44页 |
| 2.2.3 细胞株的建立 | 第44页 |
| 2.2.4 对细胞株进行PCR验证以及WB检测的结果 | 第44-45页 |
| 第二节 小鼠受精卵显微注射体系的建立 | 第45-50页 |
| 2.3 不同周龄小鼠超数排卵的效果 | 第45-47页 |
| 2.4 不同注射部位对小鼠受精卵显微注射效果的影响 | 第47-48页 |
| 2.5 不同注射液浓度对获得转基因小鼠效率的影响 | 第48-49页 |
| 2.6 不同注射液对获得转基因小鼠效率的影响 | 第49-50页 |
| 第三节 基因敲除小鼠的鉴定与分析 | 第50-53页 |
| 2.7 Trex1敲除小鼠基因型鉴定结果分析 | 第50-51页 |
| 2.8 Trex1敲除小鼠生理生化指标检测结果 | 第51-53页 |
| 2.8.1 小鼠表型分析 | 第51-52页 |
| 2.8.2 WB检测结果分析 | 第52-53页 |
| 第三章 分析与讨论 | 第53-59页 |
| 3.1 敲除载体构建及验证 | 第53页 |
| 3.2 小鼠受精卵显微注射体系的建立 | 第53-56页 |
| 3.2.1 不同周龄小鼠超数排卵的效果 | 第53-54页 |
| 3.2.2 不同注射部位对小鼠受精卵显微注射效果的影响 | 第54-55页 |
| 3.2.3 不同注射液浓度对获得转基因小鼠效率的影响 | 第55页 |
| 3.2.4 不同注射液成份对获得转基因小鼠效率的影响 | 第55-56页 |
| 3.3 Trex1基因敲除小鼠的鉴定 | 第56-59页 |
| 3.3.1 Trex1敲除小鼠基因型鉴定结果分析 | 第56-57页 |
| 3.3.2 Trex1敲除小鼠生理生化指标检测结果 | 第57-59页 |
| 第四章 结论 | 第59-61页 |
| 附录1 | 第61-63页 |
| 附录2 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 个人简历 | 第75-79页 |
