| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 中英文缩写对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 引言 | 第13-14页 |
| 2 miRNA的发现及特征 | 第14-15页 |
| ·miRNA的发现 | 第14页 |
| ·miRNA的特征 | 第14-15页 |
| 3 miRNA在基因组上的位置 | 第15-16页 |
| 4 miRNA的生物合成及作用机制 | 第16-17页 |
| 5 miRNA家族 | 第17-18页 |
| 6 调控脂肪生成的重要转录因子 | 第18-19页 |
| 7 STAT5 | 第19-20页 |
| 8 miR-135的研究综述 | 第20-22页 |
| 9 选题的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-52页 |
| 1 试验材料 | 第23-27页 |
| ·DNA样品 | 第23页 |
| ·载体与菌株 | 第23-24页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂配制 | 第25-26页 |
| ·主要数据库及分析软件 | 第26-27页 |
| 2 试验方法 | 第27-52页 |
| ·启动子预测及其双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第27-31页 |
| ·miRNA启动子区域的预测 | 第27页 |
| ·预测的启动子双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第27-31页 |
| ·细胞培养及诱导分化 | 第31-33页 |
| ·细胞的复苏 | 第31页 |
| ·细胞的常规培养 | 第31页 |
| ·细胞冻存 | 第31-32页 |
| ·3T3-L1细胞的诱导分化 | 第32页 |
| ·细胞基因组DNA、总RNA及总蛋白的提取 | 第32-33页 |
| ·细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第33-35页 |
| ·细胞的转染 | 第33-34页 |
| ·双荧光素酶相对活性的检测 | 第34-35页 |
| ·预测核心启动子片段中转录因子和突变载体的构建及荧光素酶活性检测 | 第35-36页 |
| ·预测核心启动子片段中转录因子 | 第35页 |
| ·核心转录因子STAT5a双荧光素酶突变载体的构建及荧光活性检测23 | 第35-36页 |
| ·EMSA和Ch IP验证转录因子STAT5a在细胞体外体内与miR-135a-1/2 启动子结合 | 第36-45页 |
| ·EMSA验证转录因子STAT5a在细胞体外与miR-135a-1/2 启动子结合 | 第36-41页 |
| ·Ch IP验证转录因子STAT5a在细胞体内与miR-135a-1/2 启动子结合 | 第41-45页 |
| ·超表达转录因子质粒的构建 | 第45页 |
| ·Q-PCR分析 | 第45-49页 |
| ·miRNA的定量分析 | 第45-47页 |
| ·基因的定量分析 | 第47-48页 |
| ·Ch IP-qPCR | 第48-49页 |
| ·油红O染色 | 第49页 |
| ·Western blotting分析 | 第49-51页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第50页 |
| ·转膜 | 第50页 |
| ·抗原抗体免疫反应 | 第50-51页 |
| ·抗体 | 第51页 |
| ·统计学分析 | 第51-52页 |
| 第三章 结果与分析 | 第52-70页 |
| 1 miR-135a-1 和miR-135a-2 分别在其宿主基因上的位置 | 第52-53页 |
| 2 miR-135a-1 启动子区域及调节元件鉴定 | 第53-58页 |
| ·网站预测miR-135a-1 启动子区域 | 第53页 |
| ·miR-135a-1 启动子区域分段载体的构建及双荧光活性分析 | 第53-56页 |
| ·miR-135a-1 核心转录因子的鉴定 | 第56-58页 |
| 3 miR-135a-2 启动子区域及调节元件鉴定 | 第58-65页 |
| ·网站预测miR-135a-2 启动子区域 | 第58-59页 |
| ·miR-135a-2 启动子区域分段载体的构建及双荧光素酶活性分析 | 第59-61页 |
| ·STAT5a同样结合在miR-135a-2 的核心启动子区域 | 第61-63页 |
| ·EMSA和Ch IP验证STAT5a在细胞体外体内结合miR-135a-1/2 启动子 | 第63-65页 |
| 4 STAT5a上调miR-135a的表达 | 第65-67页 |
| 5 STAT5a与APC之间存在着潜在的负反馈调节环路 | 第67-70页 |
| 第四章 讨论 | 第70-74页 |
| 结语 | 第74-75页 |
| 1 研究结论 | 第74页 |
| 2 创新性 | 第74页 |
| 3 研究的不足之处 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 研究生在读期间发表的主要论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
