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狂犬病病毒基因工程疫苗制备及基因治疗载体的改造

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表(Abbreviation)第10-12页
第1章 文献综述第12-18页
 引言第12页
   ·狂犬病及其流行概述第12页
   ·狂犬病毒研究进展第12-14页
     ·狂犬病毒的分类第12-13页
     ·狂犬病毒结构基因第13-14页
     ·狂犬病毒的免疫原性和嗜神经性第14页
   ·狂犬病疫苗研究现状第14-15页
     ·狂犬病疫苗分类第14-15页
     ·狂犬病疫苗研究进展第15页
   ·神经退行性疾病概述第15-16页
   ·基因治疗研究进展第16页
     ·基因治疗概述第16页
     ·基因治疗病毒性转运载体第16页
   ·CRISPR-Cas系统与基因编辑第16-18页
第2章 目的与意义第18-19页
   ·狂犬病重组AAV亚单位疫苗及G蛋白多克隆抗体的快速制备第18页
   ·狂犬病毒作为神经退行性疾病基因治疗载体的初步探究第18-19页
第3章 狂犬病重组AAV亚单位疫苗及G蛋白多克隆抗体的快速制备第19-48页
   ·试验材料第19-22页
     ·细胞、病毒、质粒及培养条件第19页
     ·实验动物第19页
     ·实验仪器及耗材第19-20页
     ·主要的工具酶、抗体、试剂及标准血清第20页
     ·主要培养基、抗生素及其配置第20-21页
     ·缓冲液及其配置第21-22页
     ·主要的生物学分析软件第22页
   ·试验方法第22-36页
     ·以氯化钙法制备感受态细胞第22页
     ·相关引物的设计及合成第22-24页
     ·重组腺相关病毒感染性克隆的构建第24-30页
     ·rAAV病毒包装第30-31页
     ·rAAV滴度测定-间接免疫荧光试验第31-32页
     ·Western blot检测G蛋白表达第32-33页
     ·小鼠免疫实验第33-34页
     ·中和抗体水平检测- FAVN法第34-35页
     ·小鼠攻毒试验(CVS-24)第35页
     ·小鼠血清作为G蛋白多抗-免疫荧光检测试验第35页
     ·脑内病毒含量检测第35-36页
   ·结果和分析第36-46页
     ·重组腺相关病毒(rAAV)感染性克隆质粒的构建及鉴定第36-38页
     ·rAAV病毒包装、滴度测定及G蛋白表达检测第38-40页
     ·中和抗体水平检测第40-42页
     ·疫苗免疫保护力检测第42-45页
     ·小鼠血清作为G蛋白多抗-免疫荧光检测试验第45-46页
   ·讨论第46-47页
     ·AAV病毒的包装及G蛋白表达检测第46页
     ·AAV疫苗在小鼠体内诱导产生狂犬病毒中和抗体水平的检测第46-47页
     ·攻毒实验结果分析第47页
     ·快速制备狂犬病毒G蛋白多克隆抗体第47页
   ·结论第47-48页
第4章 狂犬病毒作为神经退行性疾病基因治疗载体的初步探究第48-66页
   ·实验材料第48-51页
     ·细胞、病毒、质粒及培养条件第48页
     ·实验动物第48页
     ·实验仪器及耗材第48-49页
     ·主要的工具酶、抗体、试剂及标准血清第49页
     ·主要培养基、抗生素及其配置第49-50页
     ·缓冲液及其配置第50页
     ·主要的生物学分析软件第50-51页
   ·实验方法第51-60页
     ·相关引物的设计及合成第51-54页
     ·狂犬病病毒感染性克隆质粒的构建第54-56页
     ·稳定表达狂犬病毒P、M、G蛋白细胞系的构建第56-59页
     ·狂犬病毒缺失株的拯救第59-60页
     ·过表达 α-突触核蛋白进行PD小鼠模型的构建第60页
   ·结果第60-64页
     ·重组狂犬病毒感染性克隆质粒的构建第60-62页
     ·重组狂犬病毒缺失株的拯救第62-63页
     ·构建稳定表达狂犬病毒P、M、G蛋白细胞系第63页
     ·PD小鼠模型的构建第63-64页
   ·讨论第64-65页
     ·狂犬病毒载体安全性第64-65页
     ·稳定表达狂犬病毒P、M、G蛋白细胞系的构建第65页
   ·结论第65页
   ·后期工作第65-66页
参考文献第66-73页
致谢第73页

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