| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| ·氨基糖苷类抗生素 | 第13-15页 |
| ·井冈霉素生物合成途径的化学研究 | 第15-17页 |
| ·井冈霉素生物合成途径的遗传学研究 | 第17-20页 |
| ·糖基转移酶 | 第20-23页 |
| ·糖基转移酶的作用机制 | 第20-21页 |
| ·糖基转移酶的主要作用 | 第21-22页 |
| ·糖基转移酶在井冈霉素生物合成中的研究进展 | 第22-23页 |
| ·研究意义和内容 | 第23-25页 |
| 第二章 糖基转移酶基因原核表达系统的建立 | 第25-39页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·培养基和溶液 | 第25-27页 |
| ·实验试剂 | 第27-28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·链霉菌培养及菌种保藏 | 第29页 |
| ·链霉菌基因组DNA的小量提取 | 第29页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第29-30页 |
| ·糖基转移酶的克隆 | 第30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30页 |
| ·糖基转移酶基因的表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第32页 |
| ·菌落PCR | 第32-33页 |
| ·结果讨论 | 第33-37页 |
| ·糖基转移酶基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的验证 | 第35-37页 |
| ·原核表达重组菌的构建和验证 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-39页 |
| 第三章 乳糖代替IPTG诱导糖基转移酶在大肠杆菌中的表达 | 第39-51页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·实验溶液 | 第40-41页 |
| ·实验试剂 | 第41-42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·摇瓶培养方法 | 第42页 |
| ·乳糖和IPTG添加量诱导比较 | 第42页 |
| ·乳糖和IPTG最佳诱导温度 | 第42-43页 |
| ·乳糖和IPTG最佳诱导时间 | 第43页 |
| ·比色法测定菌体浓度 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-50页 |
| ·乳糖和IPTG添加量诱导比较 | 第44-46页 |
| ·乳糖和IPTG最佳诱导温度 | 第46-47页 |
| ·乳糖和IPTG最佳诱导时间 | 第47-49页 |
| ·乳糖和IPTG最佳诱导条件下对目的蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 糖基转移酶发酵条件摇瓶培养的研究 | 第51-75页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-53页 |
| ·菌株 | 第51-52页 |
| ·培养基和溶液 | 第52页 |
| ·实验试剂 | 第52-53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-58页 |
| ·种子液最佳培养时间 | 第53页 |
| ·发酵培养基培养方法 | 第53页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第53-54页 |
| ·酶活检测方法 | 第54页 |
| ·基础培养基对菌体生物量的影响 | 第54-55页 |
| ·碳源对糖基转移酶发酵的影响 | 第55页 |
| ·碳源添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第55页 |
| ·单一氮源对糖基转移酶发酵的影响 | 第55页 |
| ·复合氮源对糖基转移酶发酵的影响 | 第55页 |
| ·氮源添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第55-56页 |
| ·缓冲液溶液对糖基转移酶发酵的影响 | 第56页 |
| ·缓冲液溶液添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第56页 |
| ·金属离子对糖基转移酶发酵的影响 | 第56页 |
| ·金属离子添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第56页 |
| ·响应曲面 | 第56-57页 |
| ·初始pH值对糖基转移酶发酵的影响 | 第57页 |
| ·接种量对糖基转移酶发酵的影响 | 第57页 |
| ·装液量对糖基转移酶发酵的影响 | 第57-58页 |
| ·实验结果 | 第58-72页 |
| ·种子生长曲线的确定 | 第58页 |
| ·基础培养基对菌体生物量的影响 | 第58-59页 |
| ·碳源对糖基转移酶发酵的影响 | 第59-60页 |
| ·碳源添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第60-61页 |
| ·单一氮源对糖基转移酶发酵的影响 | 第61页 |
| ·复合氮源对糖基转移酶发酵的影响 | 第61-62页 |
| ·氮源添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第62-63页 |
| ·缓冲液溶液对糖基转移酶发酵的影响 | 第63-64页 |
| ·缓冲液溶液添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第64页 |
| ·金属离子对糖基转移酶发酵的影响 | 第64-65页 |
| ·金属离子添加量对糖基转移酶发酵的影响 | 第65-66页 |
| ·响应曲面 | 第66-70页 |
| ·初始pH值对糖基转移酶发酵的影响 | 第70-71页 |
| ·接种量对糖基转移酶发酵的影响 | 第71-72页 |
| ·装液量对糖基转移酶发酵的影响 | 第72页 |
| ·小结 | 第72-75页 |
| 第五章 总结和展望 | 第75-77页 |
| ·本论文的主要结论 | 第75-76页 |
| ·展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |