| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·AP-1的组成和分子结构 | 第12-13页 |
| ·AP-1的活性调节机制 | 第13-15页 |
| ·转录水平的调控 | 第13页 |
| ·翻译后调控 | 第13页 |
| ·相互作用蛋白质调控 | 第13-15页 |
| ·c-Jun蛋白与bZIP蛋白的作用 | 第14页 |
| ·c-Jun蛋白与辅助激活因子的作用 | 第14-15页 |
| ·c-Jun蛋白与同源结构域蛋白的作用 | 第15页 |
| ·AP-1的生物学活性 | 第15-17页 |
| ·AP-1与细胞增殖、分化和转化 | 第15-16页 |
| ·AP-1与细胞凋亡 | 第16页 |
| ·AP-1与胚胎发育和发生的关系 | 第16页 |
| ·AP-1参与体内免疫系统的调节 | 第16-17页 |
| ·AP-1与疾病的发生与发展 | 第17-20页 |
| ·AP-1与癌症 | 第17-18页 |
| ·AP-1活化参与细胞癌变及机制 | 第17页 |
| ·AP-1与肿瘤的侵袭和转移 | 第17-18页 |
| ·AP-1与肝纤维化 | 第18-19页 |
| ·AP-1与变应性疾病 | 第19页 |
| ·AP-1与哮喘 | 第19页 |
| ·AP-1与特应性皮炎的关系 | 第19页 |
| ·AP-1与鼻息肉的关系 | 第19页 |
| ·AP-1与病毒性肝炎 | 第19-20页 |
| ·AP-1活性的抑制 | 第20-21页 |
| ·茶多酚对AP-1信号转导通路的作用 | 第20-21页 |
| ·雷公藤内酯对AP-1的抑制 | 第21页 |
| ·糖皮质激素 | 第21页 |
| ·本题研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| ·实验方案 | 第22-23页 |
| 第二章 ac3-33基因的克隆与纯化回收 | 第23-29页 |
| ·材料和试剂 | 第23-24页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·主要试剂配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-26页 |
| ·ac3-33的克隆 | 第24-25页 |
| ·目的片段的回收 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-27页 |
| ·ac3-33的克隆 | 第26-27页 |
| ·目的片段切胶回收 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| ·ac3-33的克隆 | 第27-28页 |
| ·目的片段切胶回收 | 第28-29页 |
| 第三章 重组质粒的转化与鉴定 | 第29-44页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·菌种与载体 | 第29页 |
| ·酶及化学试剂 | 第29页 |
| ·试剂盒 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·主要试剂与培养基的配制 | 第30-31页 |
| ·目的片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·目的片段的回收(同2.3.2) | 第32页 |
| ·目的片段与pGEX4T-1载体的连接 | 第32-33页 |
| ·目的基因与载体的酶切 | 第32页 |
| ·酶切结果回收 | 第32-33页 |
| ·目的片段与载体pGEX-4T-1的连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的转化 | 第33-37页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第33-34页 |
| ·重组质粒的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的PCR扩增鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的测序鉴定分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·重组质粒的转化 | 第37页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·质粒的提取 | 第38页 |
| ·质粒的PCR扩增鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的测序 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·目的基因片段与pGEX-4T-1载体连接及重组质粒的转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的提取 | 第43页 |
| ·重组质粒的PCR扩增鉴定 | 第43-44页 |
| 第四章 ac3-33原核表达条件的优化 | 第44-57页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·宿主菌与重组质粒 | 第44页 |
| ·化学试剂 | 第44-45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·GST-AC3-33融合蛋白表达形式分析 | 第46-48页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(按照《分子克隆实验指南》(第三版)的方法) | 第47-48页 |
| ·免疫印迹(Western Blot) | 第48页 |
| ·GST-AC3-33融合蛋白表达的优化 | 第48-49页 |
| ·培养基对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第48页 |
| ·NaCl浓度对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第48页 |
| ·pH对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| ·IPTG浓度GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第49页 |
| ·诱导温度对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第49页 |
| ·诱导时间对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·融合蛋白表达形式分析 | 第49-50页 |
| ·培养基对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第50-51页 |
| ·NaCl浓度对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第51页 |
| ·pH对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| ·IPTG浓度对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| ·诱导温度对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第53页 |
| ·诱导时间对GST-AC3-33融合蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| ·融合蛋白表达蛋白表达形式的分析 | 第54-55页 |
| ·GST-AC3-33融合蛋白表达条件的优化 | 第55-57页 |
| 第五章 GST-AC3-33融合蛋白的纯化 | 第57-65页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要试剂配制 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·蛋白纯化 | 第58-59页 |
| ·蛋白样品纯化前的预处理 | 第58页 |
| ·蛋白纯化(按GenScript的Higt-Affinity Resin说明书进行操作) | 第58-59页 |
| ·高亲和GST树脂的再生与保存 | 第59页 |
| ·蛋白纯化条件的优化 | 第59-60页 |
| ·总蛋白释放方法的优化 | 第59-60页 |
| ·蛋白洗脱液浓度的优化 | 第60页 |
| ·融合蛋白含量的测定 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-62页 |
| ·蛋白纯化条件优化 | 第60-61页 |
| ·总蛋白释放方法的优化 | 第60-61页 |
| ·蛋白洗脱液浓度的优化 | 第61页 |
| ·蛋白纯化的最佳条件 | 第61-62页 |
| ·融合蛋白含量的测定 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·实验结果 | 第65页 |
| ·问题与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73页 |
