| 缩略词表 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| ·海参免疫研究进展 | 第13-16页 |
| ·海参的细胞免疫 | 第14-15页 |
| ·海参体腔细胞的种类 | 第14页 |
| ·海参体腔细胞的功能 | 第14-15页 |
| ·海参的体液免疫 | 第15-16页 |
| ·海参体内杀菌和凝集因子 | 第15-16页 |
| ·其它体液免疫因子 | 第16页 |
| ·溶菌酶的研究进展 | 第16-23页 |
| ·溶菌酶简介 | 第16-17页 |
| ·溶菌酶的分类 | 第17-21页 |
| ·c型溶菌酶(chicken type lysozyme) | 第18-19页 |
| ·g型溶菌酶(goose type lysozyme) | 第19页 |
| ·噬菌体溶菌酶(phage lysozyme) | 第19页 |
| ·植物溶菌酶(plant lysozyme) | 第19-20页 |
| ·真菌与细菌溶菌酶(Fungus and bacterial lysozyme) | 第20页 |
| ·无脊椎型溶菌酶(Invertebrate lysozyme) | 第20-21页 |
| ·双功能的i型溶菌酶-Destabilase-lysozyme | 第21页 |
| ·溶菌酶的生物学功能 | 第21-23页 |
| ·溶菌酶的应用 | 第23-28页 |
| ·溶菌酶在食品工业中的应用 | 第23-25页 |
| ·溶菌酶在新鲜海产品、肉类制品中的应用 | 第23-24页 |
| ·溶菌酶在乳制品中的应用 | 第24页 |
| ·溶菌酶在低度酒类和饮料中的应用 | 第24页 |
| ·溶菌酶在水果保鲜上的应用 | 第24页 |
| ·溶菌酶在其他食品中的应用 | 第24-25页 |
| ·溶菌酶在医学上的应用 | 第25-26页 |
| ·溶菌酶在多种疾病诊断方面的应用 | 第26页 |
| ·溶菌酶在降解壳聚糖上的应用 | 第26页 |
| ·溶菌酶在饲料中的应用 | 第26-27页 |
| ·溶菌酶在基因工程和酶工程上的应用 | 第27-28页 |
| ·海洋动物溶菌酶基因工程的研究 | 第28页 |
| ·外源基因在原核细胞中的表达 | 第28-30页 |
| ·海参溶菌酶的市场前景 | 第30-31页 |
| ·研究的主要内容、目的、意义和技术路线 | 第31-33页 |
| ·研究内容 | 第31页 |
| ·研究目的 | 第31页 |
| ·研究意义 | 第31-32页 |
| ·技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-54页 |
| ·海参溶菌酶基因的克隆与序列分析 | 第33-41页 |
| ·材料与仪器 | 第33-35页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·特异引物 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·方法与步骤 | 第35-41页 |
| ·海参体壁总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·RT-PCR | 第36-37页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物 | 第37-38页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第38页 |
| ·重组质粒的转化 | 第38-39页 |
| ·重组子的鉴定 | 第39-41页 |
| ·海参溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第41-51页 |
| ·材料和试剂 | 第41-44页 |
| ·质粒和菌种 | 第41页 |
| ·酶和试剂 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第42-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43-44页 |
| ·方法与步骤 | 第44-51页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中最佳表达条件的确立 | 第45-48页 |
| ·海参溶菌酶的纯化和复性 | 第48-51页 |
| ·重组海参溶菌酶的体外活性测定 | 第51-54页 |
| ·材料与仪器 | 第51-52页 |
| ·材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·主要实验仪器 | 第52页 |
| ·方法与步骤 | 第52-54页 |
| ·海参溶菌酶的活力测定 | 第52页 |
| ·抑菌谱的测定 | 第52-54页 |
| 第三章 结果与分析 | 第54-66页 |
| ·海参溶菌酶基因的克隆分析 | 第54-57页 |
| ·总RNA的质量分析 | 第54页 |
| ·RT-PCR扩增海参溶菌酶 | 第54-55页 |
| ·pMD18-T-Sjlys重组质粒构建及鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组子序列测定 | 第56-57页 |
| ·海参溶菌酶基因的表达分析 | 第57-63页 |
| ·pET32a(+)-Sjlys重组子的构建及鉴定 | 第57-58页 |
| ·重组菌的表达条件优化 | 第58-61页 |
| ·诱导菌种的优化 | 第59-60页 |
| ·诱导温度的优化 | 第60页 |
| ·诱导时间的优化 | 第60页 |
| ·IPTG诱导浓度的优化 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白纯化及复性 | 第61-63页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第61-63页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第63页 |
| ·重组海参溶菌酶基因的活性分析 | 第63-66页 |
| ·重组溶菌酶活力的测定 | 第63-64页 |
| ·抑菌谱的测定 | 第64-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
