宏基因组文库筛选猪场土壤氟苯尼考抗性基因
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-26页 |
| ·抗生素简介 | 第10-16页 |
| ·抗生素种类及作用机理 | 第10-11页 |
| ·抗生素使用情况介绍 | 第11-12页 |
| ·抗生素的环境影响 | 第12-15页 |
| ·氟苯尼考简介 | 第15-16页 |
| ·抗性基因研究背景 | 第16-20页 |
| ·细菌耐药机制 | 第16-18页 |
| ·ARGs及其在环境中的传播 | 第18-19页 |
| ·环境中ARGs的筛选方法 | 第19-20页 |
| ·可培养方法 | 第19页 |
| ·非培养方法 | 第19-20页 |
| ·宏基因组学概述 | 第20-25页 |
| ·宏基因组学研究策略 | 第21-24页 |
| ·环境样品的采集及富集 | 第21-22页 |
| ·DNA的提取和纯化 | 第22页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第22-23页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第23-24页 |
| ·宏基因组学在土壤活性物质开发中的应用 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-37页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·土壤样品来源 | 第26页 |
| ·菌种与质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·酶制剂和抗生素 | 第26-27页 |
| ·PCR试剂及酶切、酶连试剂 | 第27页 |
| ·试剂盒 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| ·常用溶液 | 第28-31页 |
| ·土壤基因组DNA提取溶液 | 第28-29页 |
| ·质粒提取溶液 | 第29页 |
| ·感受态细胞制备溶液 | 第29-30页 |
| ·抗生素及其他贮存溶液 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-37页 |
| ·土壤宏基因组文库的构建 | 第31-35页 |
| ·土壤基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·土壤总DNA的纯化 | 第32页 |
| ·DNA酶切及酶切片段回收 | 第32页 |
| ·CaCl_2诱导感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·钙转化 | 第32-33页 |
| ·质粒的制备 | 第33页 |
| ·质粒的酶切及酶切片段回收 | 第33-34页 |
| ·质粒的自连检测 | 第34页 |
| ·酶切片段与载体的连接及转化 | 第34页 |
| ·文库的收集 | 第34页 |
| ·质粒酶切分析 | 第34-35页 |
| ·氟苯尼考抗性基因的筛选与鉴定 | 第35-37页 |
| ·宏基因组文库的氟苯尼考抗性功能筛选 | 第35页 |
| ·菌种保存 | 第35页 |
| ·质粒抗性验证 | 第35页 |
| ·连接片段大小验证 | 第35页 |
| ·DNA测序 | 第35-36页 |
| ·插入片段的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-49页 |
| ·土壤宏基因组文库的构建 | 第37-42页 |
| ·DNA的提取和纯化 | 第37页 |
| ·基因组DNA的双酶切 | 第37-38页 |
| ·质粒的制备与酶切 | 第38-39页 |
| ·质粒自连实验 | 第39-40页 |
| ·文库的构建 | 第40-41页 |
| ·文库的质粒验证 | 第41-42页 |
| ·氟苯尼考抗性基因的筛选与鉴定 | 第42-49页 |
| ·文库的抗性筛选 | 第42-43页 |
| ·质粒的抗性验证 | 第43-44页 |
| ·连接片段大小验证 | 第44-45页 |
| ·插入片段的生物信息学分析 | 第45-49页 |
| ·2号克隆菌株的插入片段序列分析 | 第46-47页 |
| ·3号克隆菌株的插入片段序列分析 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·土壤宏基因组文库的构建 | 第49页 |
| ·克隆文库的筛选 | 第49-51页 |
| ·本研究创新点 | 第51页 |
| ·研究展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
