| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-39页 |
| 第一节 血管生成与骨发育 | 第13-25页 |
| ·膜内成骨和软骨内成骨 | 第13-14页 |
| ·促进血管生成的因子在早期骨发育中的作用 | 第14-17页 |
| ·骨中的血管 | 第17-18页 |
| ·骨细胞 | 第18-20页 |
| ·调控成骨细胞分化的转录因子 | 第20-25页 |
| 第二节 破骨细胞与血管生成 | 第25-29页 |
| ·破骨细胞对血管生成的促进作用 | 第25-27页 |
| ·破骨细胞和血管生成 | 第27-29页 |
| 第三节 缺氧与骨发育 | 第29-36页 |
| ·HIF和VEGF在骨发育中的作用 | 第31-34页 |
| ·骨再生与疾病 | 第34-36页 |
| 第四节 转录激活因子ATF4 | 第36-39页 |
| ·转录激活因子家族成员 | 第36页 |
| ·ATF4的结构 | 第36-37页 |
| ·ATF4的功能 | 第37-38页 |
| ·本课题的提出 | 第38-39页 |
| 第二章 材料与方法 | 第39-57页 |
| 第一节 实验材料 | 第39-44页 |
| ·药品试剂 | 第39-40页 |
| ·实验所用抗体 | 第40-41页 |
| ·实验所用仪器 | 第41-42页 |
| ·实验所用液体试剂配方 | 第42-44页 |
| ·Atf4基因敲除小鼠 | 第44页 |
| 第二节 实验方法 | 第44-57页 |
| ·细胞培养 | 第44页 |
| ·原代成骨细胞的分离 | 第44-45页 |
| ·小鼠骨内血管microCT成像 | 第45页 |
| ·跖骨血管生成分析(Metatarsal Angiogenesis Assay) | 第45-46页 |
| ·跖骨切片及TRAP染色 | 第46页 |
| ·小鼠血清VEGF ELISA检测 | 第46-47页 |
| ·破骨细胞活性检测 | 第47页 |
| ·免疫组织化学(IHC) | 第47-48页 |
| ·腺病毒的富集及感染 | 第48页 |
| ·RNA提取、反转录及Real-Time PCR | 第48-50页 |
| ·免疫印记(Western-blot) | 第50-51页 |
| ·体外转录和翻译 | 第51-55页 |
| ·免疫共沉淀 | 第55页 |
| ·细胞活性检测 | 第55页 |
| ·缺氧实验 | 第55-57页 |
| 第三章 ATF4对骨血管生成的作用及机制的研究 | 第57-120页 |
| 第一节 Atf4基因的缺失影响小鼠骨血管的形成 | 第57-64页 |
| ·Atf4基因敲除小鼠的骨中血管减少 | 第57-58页 |
| ·microCT分析表明Atf4基因敲除小鼠头盖骨中血管容积和密度减少 | 第58-59页 |
| ·microCT分析表明Atf4基因敲除小鼠股骨中血管容积和密度减少 | 第59-60页 |
| ·Atf4基因敲除小鼠胫骨切片中CD31的阳性面积减少 | 第60-64页 |
| 第二节 Atf4基因的缺失使小鼠成骨细胞中VEGF的表达显著减低 | 第64-68页 |
| ·Atf4基因敲除的小鼠骨中Vegf的mRNA水平降低 | 第64-66页 |
| ·Atf4基因敲除的小鼠骨中VEGF的原位表达降低 | 第66-67页 |
| ·Atf4基因敲除的小鼠血清中VEGF的含量没有改变 | 第67-68页 |
| 第三节 Atf4基因敲除小鼠的跖骨血管生成能力减弱,但可以被重组的人源VEGF恢复 | 第68-73页 |
| ·Atf4敲除小鼠的跖骨血管生成能力显著下降 | 第68页 |
| ·Atf4敲除后不影响小鼠跖骨的细胞存活能力 | 第68-70页 |
| ·VEGF恢复Atf4敲除的跖骨的血管生成能力 | 第70-72页 |
| ·FGF2对Atf4敲除的跖骨的血管生成能力没有恢复作用 | 第72-73页 |
| ·Atf4敲除的跖骨培养基中VEGF的含量降低 | 第73页 |
| 第四节 ATF4可以调节骨中HIF-1α的表达 | 第73-79页 |
| ·ATF4上调HIF-1α对Vegf启动子活性的激活 | 第73-76页 |
| ·ATF4上调HIF-1α的表达 | 第76-77页 |
| ·Atf4敲除后HIF-1α的原位表达降低 | 第77-79页 |
| 第五节 ATF4调控HIF-1α的稳定性 | 第79-90页 |
| ·Atf4敲除后缺氧对HIF-1α的诱导减弱 | 第79-81页 |
| ·缺氧条件下过表达ATF4能够上调HIF-1α | 第81-82页 |
| ·缺氧条件下过表达ATF4上调Vegf及Glut1的mRNA | 第82-85页 |
| ·缺氧条件下过表达ATF4不会影响Hif-1α的mRNA稳定性 | 第85-86页 |
| ·缺氧条件下过表达ATF4提高HIF-1α蛋白的稳定性 | 第86-87页 |
| ·缺氧条件下Atf4敲除的成骨细胞中HIF-1α蛋白的稳定性降低 | 第87-88页 |
| ·缺氧条件下J押敲除的成骨细胞中HIF-la蛋白的稳定性降低 | 第88-90页 |
| 第六节 ATF4抑制HIF-1α的泛素化降解 | 第90-99页 |
| ·ATF4抑制HIF-1α的泛素化 | 第90-93页 |
| ·缺氧处理的成骨细胞中ATF4与HIF-1α存在相互作用 | 第93-94页 |
| ·ATF4不影响PHD1,PHD2,PHD3的水平 | 第94-96页 |
| ·ATF4降低PHD1,PHD2,PHD3与HIF-1α的结合 | 第96-98页 |
| ·ATF4与PHD3相互作用,使PHD3对HIF-1α负调控减弱 | 第98-99页 |
| 第七节 Atf4敲除后,缺氧对小鼠骨血管生成的诱导能力减弱 | 第99-105页 |
| 第八节 ATF4通过激活破骨使VEGF从骨质中释放,调控血管生成 | 第105-110页 |
| ·破骨细胞的激活剂通过ATF4调节血管生成 | 第105-107页 |
| ·破骨细胞释放骨质中的VEGF | 第107-110页 |
| 第九节 PKC信号通路通过ATF4调控破骨细胞的分化和活性,调节骨血管生成 | 第110-120页 |
| ·PMA上调ATF4的表达 | 第111-112页 |
| ·PMA促进跖骨的血管生成 | 第112-114页 |
| ·PKC信号途径通过ATF4促进跖骨的血管生成 | 第114-120页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第120-124页 |
| 参考文献 | 第124-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第139页 |
