| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语（Abbreviations) | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 紫花苜蓿耐盐性研究进展 | 第13-14页 |
| ·紫花苜蓿耐盐品种选育概况 | 第13-14页 |
| ·转基因技术在苜蓿中的应用 | 第14页 |
| 2 RNA结合蛋白与基因表达调控 | 第14-16页 |
| 3 RBPs研究进展 | 第16-19页 |
| ·RBPs结构特点 | 第16-17页 |
| ·RBPs功能及分类 | 第17-19页 |
| 4 与逆境胁迫相关的植物RBPs | 第19-21页 |
| ·RBPs与低温胁迫 | 第19-20页 |
| ·RBPs与高温胁迫 | 第20页 |
| ·RBPs与抗旱性 | 第20页 |
| ·RBPs与盐胁迫 | 第20-21页 |
| ·RBPs与ABA | 第21页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 紫花苜蓿MSRBP基因的克隆 | 第23-37页 |
| 1材料 | 第23-25页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·克隆载体与菌株 | 第23页 |
| ·生化试剂及工具酶 | 第23页 |
| ·溶液与培养基 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·引物合成与测序 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-31页 |
| ·植物材料的培养 | 第25页 |
| ·植物总RNA提取纯化及检测 | 第25-26页 |
| ·MsRBP 3'-RACE | 第26-27页 |
| ·MsRBP 5'-RACE | 第27-29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的鉴定与测序 | 第30页 |
| ·序列分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·紫花苜蓿总RNA的检测 | 第31页 |
| ·目的基因全长序列的获得 | 第31-33页 |
| ·MsRBP基因编码蛋白序列分析 | 第33-35页 |
| 4 小结 | 第35-37页 |
| 第三章 紫花苜蓿MsRBP基因的亚细胞定位 | 第37-44页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·克隆载体与菌株 | 第37页 |
| ·生化试剂及工具酶 | 第37页 |
| ·溶液及培养基 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·引物合成与测序 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·植物材料的培养 | 第38页 |
| ·构建克隆载体pMD-MsRBP | 第38页 |
| ·提取质粒 | 第38-39页 |
| ·构建融合表达载体pA7-GFP-MsRBP | 第39-40页 |
| ·制备金粉悬液 | 第40页 |
| ·基因枪子弹的制备 | 第40页 |
| ·洋葱表皮预培养 | 第40页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮 | 第40-41页 |
| ·瞬时表达检测 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·融合表达载体pA7-GFP-MsRBP的构建及鉴定 | 第41页 |
| ·MsRBP蛋白在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位 | 第41-43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 MsRBP基因的表达分析 | 第44-50页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·酶与化学试剂 | 第44页 |
| ·溶液 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·引物设计与合成 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-46页 |
| ·植物材料的培养 | 第45页 |
| ·胁迫处理 | 第45页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第45页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-48页 |
| ·MsRBP基因在不同组织中的表达特性 | 第46页 |
| ·MsRBP基因在NaCl胁迫条件下的表达特性 | 第46-47页 |
| ·MsRBP基因在ABA胁迫条件下的表达特性 | 第47-48页 |
| ·MsRBP基因在PEG胁迫条件下的表达特性 | 第48页 |
| 4 小结 | 第48-50页 |
| 第五章 MsRBP基因超表达载体的构建及对烟草和苜蓿的遗传转化 | 第50-67页 |
| 1 材料 | 第50-52页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·克隆载体与菌株 | 第50页 |
| ·生化试剂及工具酶 | 第50-51页 |
| ·溶液与培养基 | 第51-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·引物合成与测序 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-59页 |
| ·引物设计 | 第52-53页 |
| ·超表达载体pBI121-MsRBP的构建 | 第53-54页 |
| ·农杆菌感受态的制备、转化及检测 | 第54-55页 |
| ·pBI121-MsRBP-农杆菌的准备 | 第55页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第55页 |
| ·苜蓿无菌苗的准备 | 第55-56页 |
| ·农杆菌介导的苜蓿转化 | 第56页 |
| ·基因组DNA提取及检测 | 第56-57页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第57-58页 |
| ·总RNA提取及检测 | 第58页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第58页 |
| ·转基因植株GUS报告基因组织化学检测 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-66页 |
| ·超表达载体的构建及鉴定 | 第59-61页 |
| ·超表达载体的农杆菌转化及检测 | 第61-62页 |
| ·转基因植株的获得 | 第62页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第62-64页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第64-65页 |
| ·转基因植株的GUS检测 | 第65-66页 |
| 4 小结 | 第66-67页 |
| 第六章 MsRBP基因对拟南芥的遗传转化及初步鉴定 | 第67-75页 |
| 1 材料 | 第67页 |
| ·植物材料 | 第67页 |
| ·生化试剂及工具酶 | 第67页 |
| ·溶液与培养基 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-69页 |
| ·拟南芥的培养 | 第67页 |
| ·农杆菌的准备 | 第67-68页 |
| ·花序侵染法转化拟南芥 | 第68页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第68页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的PCR检测 | 第68页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的RT-PCR检测 | 第68页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的GUS报告基因组织化学检测 | 第68-69页 |
| ·NaCl胁迫下种子萌发实验 | 第69页 |
| ·NaCl胁迫下根长的测定 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-74页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的获得 | 第69页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的PCR检测 | 第69-70页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的RT-PCR检测 | 第70-71页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的GUS检测 | 第71页 |
| ·盐胁迫下过表达MsRBP抑制种子萌发 | 第71-72页 |
| ·盐胁迫下过表达MsRBP抑制根的生长 | 第72-74页 |
| 4 小结 | 第74-75页 |
| 第七章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 1 结论 | 第75-76页 |
| 2 工作展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 附录 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
