| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-29页 |
| 1 水稻褐飞虱 | 第15-16页 |
| ·褐飞虱及其危害 | 第15页 |
| ·褐飞虱的主要防治措施及存在的问题 | 第15-16页 |
| 2 苏云金杆菌及其 Cry 毒素 | 第16-21页 |
| ·苏云金杆菌研究进展 | 第16-17页 |
| ·Bt Cry 毒素及其应用 | 第17-18页 |
| ·Cry 毒素的毒理机制 | 第18-19页 |
| ·Cry 毒素的结构功能研究 | 第19-21页 |
| ·Cry 毒素存在的缺陷 | 第21页 |
| 3 Cry 毒素分子改造研究进展 | 第21-23页 |
| ·定点突变改造 Cry 毒素 | 第21-22页 |
| ·分子杂交改造 Cry 毒素 | 第22页 |
| ·片段删除改造 Cry 毒素 | 第22-23页 |
| 4 Cry 毒素对半翅目害虫毒性研究进展 | 第23-25页 |
| ·Cry 毒素对褐飞虱毒性的研究 | 第23-24页 |
| ·Cry 毒素对其他半翅目害虫毒性的研究 | 第24-25页 |
| 5 噬菌体短肽文库及其应用 | 第25-26页 |
| ·噬菌体短肽文库概述 | 第25页 |
| ·噬菌体短肽文库的应用 | 第25-26页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第26-29页 |
| 第二章 褐飞虱的饲养及膜饲喂法的建立 | 第29-34页 |
| 1 材料与方法 | 第29-31页 |
| ·褐飞虱虫源及饲养 | 第29页 |
| ·褐飞虱人工饲料 | 第29-31页 |
| ·褐飞虱若虫膜饲喂法取食率计算 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-33页 |
| ·塑料罐扩大饲养褐飞虱 | 第31页 |
| ·改良膜饲喂法饲喂褐飞虱取食率统计 | 第31-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 cry1Ab 基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备 | 第34-53页 |
| 1 材料与方法 | 第34-47页 |
| ·供试菌株与实验动物 | 第34页 |
| ·载体、质粒与蛋白 | 第34页 |
| ·培养基、试剂与缓冲液 | 第34-36页 |
| ·pCry1Ab-GST 表达载体的构建 | 第36-42页 |
| ·GST-Cry1Ab 融合蛋白的表达及纯化 | 第42-45页 |
| ·Cry1Ab 蛋白兔源抗血清的制备 | 第45页 |
| ·Cry1Ab 兔源抗血清效价测定 | 第45-46页 |
| ·Cry1Ab 兔源抗血清特异性分析 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-52页 |
| ·cry1Ab 基因的克隆及表达载体构建 | 第47-49页 |
| ·Cry1Ab 蛋白的表达及纯化 | 第49-51页 |
| ·间接 ELISA 法测定 Cry1Ab 抗血清效价 | 第51页 |
| ·Western blot 鉴定 Cry1Ab 兔源抗血清特异性 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 Cry1Ab 毒素与褐飞虱肠道关系的研究 | 第53-70页 |
| 1 材料与方法 | 第53-61页 |
| ·试虫与菌株 | 第53页 |
| ·培养基、试剂与缓冲液 | 第53-55页 |
| ·GST-Cry1Ab 纯化蛋白的制备 | 第55-56页 |
| ·褐飞虱肠道酶液提取 | 第56页 |
| ·褐飞虱组织酶液对 Cry1Ab 原毒素的体外水解 | 第56-58页 |
| ·BBMV 的提取 | 第58-59页 |
| ·Cry1Ab 蛋白与褐飞虱中肠 BBMV 结合活性检测 | 第59-60页 |
| ·Cry1Ab 蛋白对褐飞虱及小菜蛾毒性测定 | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-68页 |
| ·GST-Cry1Ab 可溶蛋白的表达及纯化 | 第61页 |
| ·褐飞虱肠道酶液对 Cry1Ab 原毒素的体外水解作用 | 第61-65页 |
| ·褐飞虱肠腔酶液活化的 Cry1Ab 毒素毒性功能鉴定 | 第65页 |
| ·Cry1Ab 毒素能够与褐飞虱中肠 BBMV 结合 | 第65-67页 |
| ·Cry1Ab 毒素对褐飞虱毒性作用测定 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 Cry1Ab 毒素决定受体识别三个环区重要性分析 | 第70-89页 |
| 1 材料与方法 | 第70-80页 |
| ·试虫与菌株 | 第70页 |
| ·载体、质粒与蛋白 | 第70页 |
| ·培养基、试剂与缓冲液 | 第70-72页 |
| ·cry1Ab 基因待改造片段 MF-18T 亚克隆的构建 | 第72-73页 |
| ·利用 gbp3.1 序列对 mf 片段中决定受体识别环区序列的替换 | 第73-77页 |
| ·改造后 cry1Ab 基因的重构 | 第77-79页 |
| ·重组 Cry1Ab 蛋白的原核表达及纯化 | 第79页 |
| ·受体识别 loop 替换后对鳞翅目小菜蛾毒性的影响 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-87页 |
| ·cry1Ab 基因待改造片段 MF-18T 亚克隆的构建 | 第80页 |
| ·利用短肽 GBP3.1 核苷酸序列对 cry1Ab 基因 DomainⅡ3 个 loop 的逐一替换72 | 第80-84页 |
| ·改造后 pCry1Ab-GST 亚克隆的构建 | 第84-85页 |
| ·Loop1、loop2 及 loop3 分别被替换后 Cry1Ab 毒素三维空间结构预测 | 第85页 |
| ·Loop1、loop2 及 loop3 分别被替换后 Cry1Ab 毒素蛋白的制备 | 第85-86页 |
| ·Loop1、loop2 及 loop3 分别被替换前后 Cry1Ab 毒素对小菜蛾生物测定 | 第86-87页 |
| 3. 讨论 | 第87-89页 |
| 第六章 褐飞虱中肠内膜结合短肽的筛选 | 第89-106页 |
| 1 材料与方法 | 第89-100页 |
| ·供试菌株 | 第89页 |
| ·载体、质粒与蛋白 | 第89页 |
| ·培养基、试剂与缓冲液 | 第89-92页 |
| ·噬菌体短肽文库筛选能够与褐飞虱中肠内膜结合的短肽 | 第92-95页 |
| ·短肽-egfp 融合基因亚克隆的构建 | 第95-98页 |
| ·短肽-EGFP 融合蛋白的表达及纯化 | 第98-99页 |
| ·短肽与褐飞虱中肠内膜结合能力的验证 | 第99-100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-104页 |
| ·噬菌体短肽文库筛选能够与水稻褐飞虱中肠内膜结合的短肽序列 | 第100页 |
| ·短肽-egfp 融合基因表达载体的构建 | 第100-101页 |
| ·短肽-EGFP 融合蛋白的表达及纯化 | 第101-102页 |
| ·荧光显微镜形态学方法验证短肽-EGFP 蛋白与 BBMV 的结合活性 | 第102-103页 |
| ·Pull-down 方法验证短肽-EGFP 蛋白与 BBMV 的结合活性 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 第七章 定向改造、筛选对褐飞虱高毒力的新型 Cry 毒素 | 第106-136页 |
| 1 材料与方法 | 第106-117页 |
| ·供试菌株 | 第106页 |
| ·载体、质粒与蛋白 | 第106页 |
| ·培养基、试剂与缓冲液 | 第106-108页 |
| ·对受体识别 loop 的定向替换 | 第108-112页 |
| ·改造后新型 cry 基因的重构 | 第112-113页 |
| ·新型 Cry 蛋白的表达与纯化 | 第113-114页 |
| ·新型 Cry 蛋白稳定性分析 | 第114页 |
| ·新型 Cry 蛋白与褐飞虱中肠 BBMV 结合活性的检测 | 第114-115页 |
| ·新型 Cry 蛋白的毒力测定 | 第115-116页 |
| ·褐飞虱若虫中肠作用超微形态观察 | 第116-117页 |
| 2 结果与分析 | 第117-133页 |
| ·短肽 P1Z 与 P2S 核苷酸对 cry1Ab 基因决定受体识别 loop 的替换 | 第117-124页 |
| ·新型 Cry 蛋白的表达及纯化 | 第124-125页 |
| ·新型 Cry 蛋白的稳定性分析 | 第125-128页 |
| ·新型 Cry 蛋白与褐飞虱中肠 BBMV 的结合活性测定 | 第128-129页 |
| ·六株新型 Cry 蛋白的毒性测定 | 第129-131页 |
| ·Cry1Ab-2S 对褐飞虱中肠内膜上皮细胞的消解作用 | 第131-133页 |
| 3 讨论 | 第133-136页 |
| 参考文献 | 第136-146页 |
| 致谢 | 第146页 |
