| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1 miRNA概述 | 第15-16页 |
| ·miRNA的起源和加工 | 第15页 |
| ·miRNA的调控机制 | 第15-16页 |
| 2 miRNA的研究方法 | 第16-20页 |
| ·miRNA的生物信息学分析方法 | 第16-17页 |
| ·新 miRNA的预测 | 第17页 |
| ·miRNA的靶基因预测 | 第17页 |
| ·miRNA的分子生物学研究方法 | 第17-20页 |
| ·Real-time PCR | 第18-19页 |
| ·基因芯片 | 第19页 |
| ·Northern Blot | 第19-20页 |
| ·高通量测序 | 第20页 |
| 3 肝再生研究进展 | 第20-22页 |
| ·细胞因子、生长因子的肝再生研究 | 第21页 |
| ·miRNA的肝再生研究 | 第21-22页 |
| 4 条纹斑竹鲨及其肝再生研究 | 第22-23页 |
| ·条纹斑竹鲨基本特征 | 第22页 |
| ·条纹斑竹鲨的肝再生研究 | 第22-23页 |
| 5 本课题实验方案设计 | 第23-25页 |
| ·研究目的 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 肝脏 2/3 部分切除再生模型建立 | 第25-27页 |
| 1 材料与试剂 | 第25页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-27页 |
| ·鲨鱼饲养 | 第25页 |
| ·鲨鱼肝脏 2/3 部分切除再生模型建立 | 第25-27页 |
| 第三章 正常和再生肝组织 miRNA测序 | 第27-49页 |
| 1 材料和数据库 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·小 RNA 库构建 | 第27-28页 |
| ·深度测序 | 第28页 |
| ·基本信息分析 | 第28-30页 |
| ·数据处理及统计 | 第28-30页 |
| ·miRNA鉴定 | 第30页 |
| ·高级信息分析 | 第30-31页 |
| ·miRNA基因簇分析 | 第30页 |
| ·miRNA表达分析 | 第30页 |
| ·miRNA靶基因预测 | 第30-31页 |
| ·GO 分析 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-46页 |
| ·基本信息分析结果 | 第31-39页 |
| ·小 RNA 数据处理及分布统计结果 | 第31-32页 |
| ·miRNA鉴定结果 | 第32-39页 |
| ·高级信息分析结果 | 第39-46页 |
| ·miRNA基因簇分析结果 | 第39-42页 |
| ·miRNA表达分析结果 | 第42页 |
| ·miRNA靶基因预测结果 | 第42页 |
| ·GO 分析结果 | 第42-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 正常和再生肝组织 miRNART-PCR | 第49-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第49页 |
| ·材料与仪器 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-53页 |
| ·miRNA选择 | 第49-50页 |
| ·RT-PCR 引物设计 | 第50-51页 |
| ·Total RNA 的提取及检测 | 第51页 |
| ·反转录反应 | 第51-52页 |
| ·miRNA于正常肝组织 PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·肝再生不同时期 miRNAReal-time PCR 分析 | 第52-53页 |
| ·Real-time PCR 数据处理方法 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·总 RNA 检测结果 | 第53-54页 |
| ·miRNA于正常肝组织 RT-PCR 检测结果 | 第54页 |
| ·肝再生不同时期 miRNAReal-time PCR 分析结果 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 鲨鱼再生肝组织差异表达基因的筛选 | 第58-70页 |
| 1 材料与试剂 | 第58-59页 |
| ·材料与仪器 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-64页 |
| ·Total RNA 提取 | 第59页 |
| ·DDRT-PCR 分析 | 第59-62页 |
| ·反转录反应 | 第59页 |
| ·PCR | 第59-61页 |
| ·PAGE 电泳及银染 | 第61页 |
| ·差异条带的回收 | 第61页 |
| ·差异条带的二次扩增及割胶回收 | 第61-62页 |
| ·差异基因序列获得 | 第62-64页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第62页 |
| ·E.coli TG1 感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| ·连接产物的转化 | 第63页 |
| ·菌落 PCR 鉴定筛选阳性克隆 | 第63-64页 |
| ·序列测定及比对分析 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| ·Total RNA 提取结果 | 第64页 |
| ·DDRT-PCR 扩增结果 | 第64-66页 |
| ·差异条带的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第66-67页 |
| ·菌落 PCR 鉴定结果 | 第67页 |
| ·差异基因序列分析 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 总结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录 重要试剂的配制 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |